肺炎克雷伯菌對(duì)實(shí)驗(yàn)用鼠的危害與檢測(cè)

肺炎克雷伯菌是革蘭氏陰性桿菌，常成對(duì)或短鏈狀排列，具有肥厚莢膜，通常無鞭毛，無動(dòng)力，但有菌毛，目前已發(fā)現(xiàn)超過80種不同的K抗原血清型和O抗原血清型。毒力因子包括：莢膜多糖、脂多糖、菌毛、外膜蛋白、毒素（部分高毒力株可能產(chǎn)生如腸毒素、細(xì)胞毒素）。

肺炎克雷伯菌具有多重耐藥性、廣泛耐藥性甚至接近全耐藥性：

主要耐藥機(jī)制：生成β-內(nèi)酰胺酶、AmpC酶、氨基糖苷類修飾酶等酶抑制抗生素；通過氟喹諾酮類靶位改變和外排泵、脂多糖修飾等方式耐受抗生素。

耐藥基因傳播：耐藥基因常位于質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、整合子等可移動(dòng)遺傳元件上，極易在同種或不同種細(xì)菌間水平傳播。

肺炎克雷伯菌可通過腹腔、呼吸道等途徑感染小鼠，導(dǎo)致敗血癥和多器官衰竭。與其他應(yīng)激源產(chǎn)生協(xié)同危害，對(duì)實(shí)驗(yàn)研究造成干擾：炎癥指標(biāo)異常、體質(zhì)量下降與行為異常、病理改變混淆實(shí)驗(yàn)結(jié)果，毒理學(xué)、免疫學(xué)等科研實(shí)驗(yàn)無法正常進(jìn)行。

根據(jù)中國國標(biāo)GB14922-2022《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物、寄生蟲學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》肺炎克雷伯菌是SPF級(jí)大小鼠必須排除的病原體。

檢測(cè)國家標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 14926.13-2001

該標(biāo)準(zhǔn)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺炎克雷伯菌檢測(cè)的基礎(chǔ)規(guī)范，適用于小鼠、大鼠的檢測(cè)。

檢測(cè)原理

基于細(xì)菌的培養(yǎng)特性、形態(tài)學(xué)和生化反應(yīng)。

檢測(cè)流程

操作步驟：樣本接種DHL瓊脂→36℃培養(yǎng)18-24小時(shí)→挑取可疑菌落（粘液狀）→生化鑒定

分離培養(yǎng)：使用 DHL瓊脂作為選擇性培養(yǎng)基，肺炎克雷伯菌形成淡粉色光滑濕潤(rùn)的粘液狀菌落，接種針可拉出較長(zhǎng)的絲。

生化鑒定：二乙酰+、硝酸鹽還原+、甲基紅-、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)+、丙二酸鹽+、尿素酶試驗(yàn)+、賴氨酸脫羧酶+、鳥氨酸脫羧酶-、靛基質(zhì)-、半固體動(dòng)力-。（+表示陽性，-表示陽性）

分子生物學(xué)檢測(cè)（qPCR）

除國標(biāo)外，分子生物學(xué)檢測(cè)（qPCR）提升了檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性：實(shí)驗(yàn)時(shí)間≤6小時(shí)，靈敏度高，操作步驟簡(jiǎn)單，適用于大規(guī)模篩查，如中南大學(xué)病原體檢測(cè)項(xiàng)目將其納入招標(biāo)范圍。今年新招標(biāo)文件（如中南大學(xué)2025年項(xiàng)目）顯示，分子檢測(cè)方法已逐步納入國標(biāo)補(bǔ)充體系，被科研院校接受使用。

目前在用的翼和病原菌檢測(cè)試劑盒能夠很好的檢測(cè)肺炎克雷伯菌在內(nèi)的多種病原微生物，符合實(shí)驗(yàn)室的要求，使用的Biowing®Common Bacteria Primer&Probe能夠匹配到目標(biāo)病原微生物的DNA。