細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法

一、轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)概念

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源核酸（DNA/RNA）導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)，分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（外源基因短期表達(dá)）和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（基因整合至基因組長(zhǎng)期表達(dá)）兩類。核心應(yīng)用包括基因功能研究、蛋白表達(dá)及基因治療開發(fā)。

二、常用轉(zhuǎn)染方法對(duì)比

三、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程（以脂質(zhì)體法為例）

細(xì)胞準(zhǔn)備：接種對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，密度達(dá)70%-90%匯合。

復(fù)合物制備：

無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋質(zhì)粒DNA與轉(zhuǎn)染試劑（如Lip2000）。

室溫靜置15分鐘形成DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物。

轉(zhuǎn)染執(zhí)行：

移除原培養(yǎng)基，加入復(fù)合物輕搖混勻。

4-6小時(shí)后更換含血清完-全培養(yǎng)基。

結(jié)果檢測(cè)：24-72小時(shí)通過熒光顯微鏡或Western Blot驗(yàn)證表達(dá)。

四、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

血清干擾：轉(zhuǎn)染階段需使用無(wú)血清培養(yǎng)基（如Opti-MEM）。

細(xì)胞狀態(tài)：優(yōu)先選擇傳代次數(shù)少、活力>90%的細(xì)胞。

毒性控制：脂質(zhì)體與DNA比例需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化（推薦1:1至3:1）。