反相硅膠鍵合填料的選型與使用建議:
根據(jù)目標分子性質選擇
非極性化合物:優(yōu)先C18填料,利用強疏水作用實現(xiàn)高效保留。
極性化合物:選擇短鏈填料(如C4、C8)或特殊官能團填料(如CN、Diol),或通過調整流動相極性(如增加水相比例)優(yōu)化分離。
生物大分子:關注填料孔徑(需大于分子直徑)和pH耐受性,避免強疏水性導致變性。
考慮方法開發(fā)需求
高通量篩選:選擇機械穩(wěn)定性高、壽命長的填料(如高純硅膠基質),減少更換頻率。
復雜樣品分析:寬pH填料支持**條件下的分離與清洗,延長柱壽命。
梯度洗脫:低比表面積填料可迅速達到平衡,適合梯度洗脫;高比表面積填料提高上樣量,適合制備色譜。
操作條件優(yōu)化
流動相選擇:甲醇-水體系粘度較低,適合常規(guī)分離;乙腈-水體系洗脫強度更高,可縮短分析時間。
柱溫控制:較高柱溫(35-50℃)降低柱壓并加快傳質速率,提高柱效;低溫(0-15℃)可能延長保留時間,需根據(jù)需求調整。
封尾處理必要性:對堿性化合物或極性小分子,優(yōu)先選擇封尾填料;對極性大分子,可考慮未封尾填料以增強保留。
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