ONPG生化管原理和使用方法

 一、試驗用途及原理：

  用于沙門氏菌和志賀氏菌、霍亂弧菌生化鑒定。

  細菌分解乳糖依靠兩種酶的作用，一種是β-半乳糖苷酶滲透酶，它位于細胞膜上，可送乳糖分子滲入細胞，另一種β-半乳糖苷酶，亦稱乳糖酶，位于細胞內(nèi)，能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。

  具有上述兩種酶的細菌，能在24-48h發(fā)酵乳糖，而缺乏此兩種酶的細菌，不能分解乳糖。乳糖遲緩發(fā)酵菌只有β-半乳糖苷酶而缺乏β-半乳糖苷滲透酶，因而乳糖進入細胞很慢，需經(jīng)培養(yǎng)基中1%乳糖較長時間的誘導，產(chǎn)生相當數(shù)量的滲透酶后，才能較快分解乳糖，故呈遲緩發(fā)酵現(xiàn)象。

  ONPG可迅速進入細菌細胞，被β-半乳糖苷酶水解，釋放出黃色的臨位硝基苯酚，故由培養(yǎng)液變黃可迅速測知β-半乳糖苷酶的存在，從而確定該菌為乳糖遲緩發(fā)酵菌。

二、培養(yǎng)基配方（g/L）：

三、試驗方法：

  1. 將標準儲備菌株接種到非選擇性肉湯中或采用其他制備方法，制成5 McFarland濁度（約109CFU/ml）的菌懸液。

  2. 吸取0.05-0.08ml（約1-2滴）至生化管內(nèi)，36±1℃培養(yǎng)24h后，觀察實驗結果。

四、結果觀察與解釋

接種以下質控菌株，36±1℃培養(yǎng)24h：

圖1-1 ONPG生化管質控結果

五、注意事項

  本培養(yǎng)基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。

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