HPLC測定乳糖酸紅霉素的含量

乳糖酸紅霉素是紅霉素的乳糖醛酸鹽，主要抗菌活性為乳糖酸紅霉素A和含有一定活性的乳糖酸紅霉素B、C ?！吨袊幍?000年版采用微生物檢定法進(jìn)行含量測定 ，英國藥典和歐洲藥典均采用HPLC 。鑒于微生物檢定法影響因素較多，故采用液相色譜測定乳糖酸紅霉素含量的方法。紅霉素A（96。...
   乳糖酸紅霉素是紅霉素的乳糖醛酸鹽，主要抗菌活性為乳糖酸紅霉素A和含有一定活性的乳糖酸紅霉素B、C 。《中國藥典2000年版采用微生物檢定法進(jìn)行含量測定 ，英國藥典和歐洲藥典均采用HPLC 。鑒于微生物檢定法影響因素較多，故采用液相色譜測定乳糖酸紅霉素含量的方法。
1 實(shí)驗(yàn)部分
1．1 儀器與試藥
LC—lOAD HPLC和SPD—IOA紫外檢測器（日本島津）。紅霉素A（96.7％）、紅霉素B（99.0％）、紅霉素C（97.3％）對照品（Council of Europe europenpharmacopoeia，BP 907一F67029 straspourg CEDEX1）；N一去甲基紅霉素A對照品（中國藥品生物制品檢定所）；注射用乳糖酸紅霉素（大連美羅大藥廠）；乙腈、甲醇為色譜純。
1．2 方法與結(jié)果
1．2．1 色譜條件
Hypersil BDS色譜柱（4.6 mln×200 min，5 ，大連依利特科學(xué)儀器有限公司），流動(dòng)相為0.01 mol/L 磷酸氫二鉀一乙腈（60：40）；稀釋液為pH 7.0磷酸鹽緩沖液一甲醇（15：1）；檢測波長215nm；流速1.0 ml/min；柱溫35℃ ；進(jìn)樣20μL。
1．2．2 對照品溶液的配制
    精密稱取紅霉素A對照品51.0 mg、紅霉素B、C對照品2.5 mg和N一去甲基紅霉素A 2.5 mg置25 ml量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為對照品溶液。進(jìn)樣20μL進(jìn)行測定。
1．2．3 線性關(guān)系
    精密稱取紅霉素A對照品適量（相當(dāng)于紅霉素25 mg），置10 ml量瓶中，加稀釋液至刻度，搖勻，濾過。精密量取上述溶液l、2、5、10、20、40、80、100μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積對濃度（mg/ml ）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程為：A ：98.98c一13.26（r=0.9999），表明紅霉素在0.125～l2.5 ?g/ml 的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
1．2．4 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)
    取“1．2．7”項(xiàng)下的溶液。在0、2、5 h測定主峰面積，結(jié)果在5 h內(nèi)峰面積無變化，溶液較穩(wěn)定。
1．2．5 回收率試驗(yàn)
    考慮到樣品中可能存在游離的乳糖酸，為了考察其對含量測定的影響，按“1．2．7”項(xiàng)下濃度的80％、100％、120％精密稱取乳糖酸紅霉素各兩份，按工藝配比加入適量乳糖酸鈉輔料，分別置25 ml量瓶中，加入稀釋液溶解，至刻度，搖勻，濾過，照“1．2．7”項(xiàng)下方法測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果輔料對測定無干擾。
1．2．6 方法精密度按“1．2．7”項(xiàng)下方法，對同一批號(hào)樣品，分別取樣平行測定5次，求得含量的RSD=1.6l％，表明分析方法精密度較好。
1．2．7 樣品的測定
    取樣品適量，精密稱定，加稀釋液制成含紅霉素2.0 mg/ml 的溶液。作為供試品溶液；精密量取供試品溶液20μL，注入液相色譜儀。另取紅霉素A、B、C對照品適量，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，3批樣品的含量測定按干燥品以乳糖酸紅霉素計(jì)，其結(jié)果分別為93.8％ 、94.1％和93.7％。
2 討論
    文中試驗(yàn)主要以乳糖酸紅霉素A計(jì)算，含量測定結(jié)果為乳糖酸紅霉素A、B、c的總含量 英國藥典（2000版）所用色譜柱為PLPP 100A，成本較高，國內(nèi)較少使用。試用ODS柱，因叔丁醇黏度大，柱效下降很快，所以，采用Hypersil BDS 4.6 mm×200mm色譜柱，各峰間分離度等系統(tǒng)適用性均達(dá)到了英國藥典的要求。在試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，由于流動(dòng)相系統(tǒng)pH
為9.2，緩沖液僅為0.01 mol/L 磷酸氫二鉀，因此，流動(dòng)相的緩沖容量很低，對色譜柱填料的溶解度較高，使得該方法的耐用性較差。