熒光素標(biāo)記醛縮酶A抗體IgG相關(guān)產(chǎn)品信息

熒光素標(biāo)記醛縮酶A抗體IgG相關(guān)產(chǎn)品信息

DEAE纖維素柱層析法 
標(biāo)記過(guò)多或過(guò)少熒光素的抗體分子可用DEAE-纖維素柱層析法除去。方法如下： DEAE-纖維素柱的裝柱，洗脫、再生方法等與提純IgG方法相同。裝柱所需DEAE-纖維素量以干重每克交換20～50mg標(biāo)記蛋白量為宜 
。常用梯度洗脫法如下： 
（1）層析柱用0.01mol/L、pH7.2PB平衡，標(biāo)記物上柱后，先用0.01mol/L、pH7.2PB洗脫，洗出無(wú)色或淡綠色液體，洗脫液量（根據(jù)床體積大小每梯度乘3），然后依下列各種離子強(qiáng)度洗脫液， 
分別洗脫和收集： 
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.05mol/L NaCl）……洗脫部分1。 
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.01mol/L NaCl）……洗脫部分2。 
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.02mol/L NaCl）……洗脫部分3。 
將此三部分收集液（每管5ml）分別測(cè)定其F/P比值，0.05mol/L NaCl pH7.2PB洗脫液280nm光密度高峰管合并，濃縮保存?zhèn)溆?。因這部分非特異性染色熒光zui少，是比較好的熒光抗體。其他兩部分可以廢棄。 
（2）柱上吸附的過(guò)度標(biāo)記蛋白可繼續(xù)增加NaCl的濃度至 
2.0mol/L洗脫完。 
經(jīng)過(guò)DEAE-纖維素層析后的標(biāo)記抗體，其抗體量一般約損失50%，因此有些要求不太高的抗體，如抗細(xì)菌熒光抗體，不一定要這樣處理，可用染色效價(jià)測(cè)定的稀釋法除去非特異性染色。

熒光抗體稀釋法 
先測(cè)定熒光抗體特異性染色與非特異性染色的效價(jià)，若二者效價(jià)相差較大，則可將熒光抗體稀釋至一臨界濃度，使特異性染色呈陽(yáng)性，而使非特異性染色保持陰性，稀釋方法和染色效價(jià)測(cè)定方法相同。