葡萄糖氧化酶，GOX

葡萄糖氧化酶，GOX

a 有機(jī)溶媒法
粉碎后的新鮮材料在0℃以下加入5～10 倍量的丙酮，迅速攪拌均勻，可破碎細(xì)胞膜，破壞蛋白質(zhì)與脂質(zhì)的結(jié)合。蛋白質(zhì)一般不變性，被脫脂和脫水成為干燥粉末。用少量洗，經(jīng)濾紙干燥，如脫氫酶等可保存數(shù)月不失去活性。
b 自溶法
將待破碎的鮮材料在一定pH 和適當(dāng)?shù)臏囟认拢米陨淼牡鞍酌笇⒓?xì)胞破壞，使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來(lái)。比較穩(wěn)定，變性較難，蛋白質(zhì)不被分解而可溶化。利用該法可從胰臟制取羧肽酶。自體融解時(shí)需要時(shí)間，需加少量甲苯、氯仿等。應(yīng)防止細(xì)菌污染。于溫室30℃左右較早溶化。自體融解過(guò)程中PH 顯著變化，隨時(shí)要調(diào)節(jié)pH。自溶溫度選在0～4℃，因自溶時(shí)間較長(zhǎng)，不易控制，所以制備活性蛋白質(zhì)時(shí)較少用。
c 酶法
與前述的自體融法同理，用胰蛋白酶等蛋白酶除去變性蛋白質(zhì)。但值得提出的是溶菌酶處理時(shí)，它能水解構(gòu)成枯草菌等菌體膜的多糖類(lèi)。能溶解菌的酶分布很廣。尤其卵白中含量高，而多易結(jié)晶化。1g 菌體加1～10mg 溶菌酶， pH6.2～7.01h 內(nèi)*溶菌。于生理食鹽水或0.2mol 蔗糖溶液中溶菌，雖失去細(xì)胞膜，但原形質(zhì)沒(méi)有脫出。除溶菌酶外，蝸牛酶及纖維素酶也常被選為破壞細(xì)菌及植物細(xì)胞用。表面活性劑處理較常用的有十二烷基磺酸鈉、氯化十二烷基吡淀及去氧膽酸鈉等。此外一些細(xì)胞膜較脆弱的細(xì)胞，可把它們置于水或低滲緩沖劑中透析將細(xì)胞脹破。