液相色譜柱使用方法和養(yǎng)護(hù)

蘇州市萊頓科學(xué)儀器有限公司

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液相色譜柱使用方法和養(yǎng)護(hù)

誤區(qū)一：HPLC柱不可反沖
    否。通常液相色譜柱的設(shè)計(jì)的耐壓值遠(yuǎn)高于zui大操作壓力（大約2倍）。因此，對(duì)于穩(wěn)定的填料床，如果使用合適的流動(dòng)相和合理的時(shí)間分配，填的好柱子能夠左右開弓。反過來使用HPLC柱的原因有以下幾點(diǎn)：換柱時(shí)反沖，清洗柱頭強(qiáng)吸附的物質(zhì)，以及沖洗出殘留物質(zhì)防止壓力增大。
   
    但是有一個(gè)特例，如果廠家在柱頭使用了大粒度的填料，反沖會(huì)沖出這一部分填料。通常而言，出口處的填料粒度要比整支柱子zui小的還要小。比如標(biāo)稱5μm的粒度，實(shí)際粒度在3-7μm，則出口處的粒度必須比3μm要小，這才能夠保證柱子末端的填料不會(huì)被沖出去。
   
    那么為什么廠家要在入口和出口處使用不同粒度的填料呢？因?yàn)榇罅６鹊牟蝗菀锥?，比?/span>0.5μm的柱子比起同樣2μm的柱子更容易堵塞。因此為了避免壓力的快速升高，就要生產(chǎn)出更加有容差，大粒徑填料入口的柱子。
   
    博主注：柱子能不能反沖從我一開始接觸就遇到了，有時(shí)候不管能不能，若是進(jìn)過了臟東西，非要這樣做不可，因?yàn)椴豢赡茏屗刂优芤槐?，費(fèi)時(shí)費(fèi)錢。實(shí)際上，能不能反沖直接決定于填料床的模型和實(shí)際填料到底有什么“添加劑”在里面，而這些資料waters，agilent，Phenomenex是不會(huì)給我們的。經(jīng)驗(yàn)表明，反沖效果的是菲羅門，手上的不論是luna還是Synergi，都能夠這樣，其中一支更是創(chuàng)下了實(shí)驗(yàn)室反沖柱的神話–正過來壽終正寢，結(jié)果反過來又*，用了接近一半的壽命，汗|||
   
    誤區(qū)二：所有的C18（L1）柱都相同
    否。早期HPLC體系中，C18是*的反向色譜的鍵合固定相，因此C18就作為了反向色譜柱的標(biāo)準(zhǔn)并且許多*也樂于使用。因?yàn)獒t(yī)藥工業(yè)zui先采用HPLC，并且管理機(jī)構(gòu)也不愿意廠家搞出新花樣。FDA和USP也給出了提交新藥品應(yīng)用時(shí)設(shè)計(jì)的分析方法分類。給予了C18的HPLC柱子分類為“L”，因?yàn)?/span>C18色譜柱大部分作為提交新藥的方法柱，C18就成為了L1，就是*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)柱。但更多的固定相出現(xiàn)，就以新的L值命名。（L7=C8，L10氰基，L11苯基）。
   
    問題來了，因?yàn)樯唐坊?/span>C18合成條件不同，使用的不盡相同的作硅膠基體材料，就導(dǎo)致了反向柱有不同的性能。比如說：有的廠家使用一氯甲基硅烷，和小表面積的硅膠（如圖），又有的使用同種硅烷，但是鍵合在大表面積硅膠上。這樣就會(huì)導(dǎo)致大表面積的更像C18。低鍵合相優(yōu)勢(shì)會(huì)有未反應(yīng)的硅醇羥基，能夠?qū)е禄旌系臉悠繁Ａ魴C(jī)理。所以廠商就使用二氯或者三氯硅烷，可以使硅烷流動(dòng)屬性降低，鍵合相就會(huì)薄一些。而為了使沒有反應(yīng)完的硅醇羥基消失，廠家就用小烷基封端來屏蔽（如三乙基氯硅烷）。硅醇基是中pH條件下簡(jiǎn)單化合物拖尾的始作俑者。所以許多廠家使用了雙封端技術(shù)，就是用第二個(gè)小的硅烷來獲得更加惰性的表面。廠家也使用了聚合物材料作為基體，然后多多少少鍵合C18，這就導(dǎo)致了柱子C18總量參差不齊，但依然還是作為C18（L1）來作為標(biāo)準(zhǔn)柱。也有的使用純烷基硅烷鍵合，那么就表現(xiàn)出不同的反應(yīng)特性，提供了與氯硅烷不同的C18鍵合相條件。
   
    所以呢，此C18非彼C18在今天看來特別有意義。龍生九子，子子不同，因此用戶分析開發(fā)的時(shí)候需要一致的柱子來獲得穩(wěn)健的方法。研究人員也開始研究哪些C18有類似的保留特點(diǎn)和選擇性。所以就發(fā)現(xiàn)有的C18便顯出*與C18相反的特性。
   
    博主注：只知道C18悠久，沒有想到這么早，一般認(rèn)為封端的就好些，比如大連國(guó)產(chǎn)的那個(gè)，用著用著柱效下降很快，我就認(rèn)為和這個(gè)鍵合啊，封端啊有關(guān)系。

誤區(qū)三：保護(hù)柱不影響分離效果
    否首先，配一個(gè)保護(hù)柱很好。如果固定相選擇錯(cuò)誤，保護(hù)柱也能夠?qū)Ψ蛛x有效果。要明確的是：保護(hù)柱是保護(hù)分析柱避免被高殘留的組分污染用的，尤其是那些不想進(jìn)讓它柱子的部分。保護(hù)柱比起分析柱便宜許多，所以污染的保護(hù)柱能夠替換的更加勤。
   
    理想的結(jié)果是，保護(hù)柱的固定相和分析柱恰好相同。如果固定相保留強(qiáng)（如高載碳量和混合相），就能夠使得保留便宜而影響分離，甚至導(dǎo)致不同的選擇性。如果保留弱，問題就不那么明顯，除非固定相影響整個(gè)體系選擇性。
   
    為了使保護(hù)柱zui小化的影響分離，保護(hù)柱需要合適的裝配。顯然，保護(hù)柱安插在進(jìn)樣口和分析柱之間，但是如果管路太長(zhǎng)（太長(zhǎng)或者內(nèi)徑太大），就會(huì)造成額外的峰展寬，從而影響分離。系統(tǒng)引入整合保護(hù)柱，從以往的報(bào)道看，基本上會(huì)達(dá)到分析柱的*水平。但是，整合保護(hù)柱基本上和卡式色譜柱捆綁，因此不是那么流行。從操作的角度說，應(yīng)當(dāng)在不影響HPLC系統(tǒng)的前提下容易卸下和更換。
   
    理論上，如果保護(hù)柱延長(zhǎng)了柱長(zhǎng)，那么就對(duì)色譜分離有額外的塔板數(shù)。但就像前面說的，保護(hù)柱要么在*條件使用，要么在zui糟糕的條件下除去。所以保護(hù)柱的優(yōu)勢(shì)就是延長(zhǎng)柱壽命，而沒有帶來總體分析效率的提高。
   
    博主注：zui早接觸保護(hù)柱，或者叫預(yù)柱，實(shí)在接觸waters設(shè)備的時(shí)候，兩個(gè)圓圓的蓋子，儀器標(biāo)配，缺點(diǎn)是不銹鋼管路還那么長(zhǎng)，簡(jiǎn)單的保護(hù)部分被拉出一大截死體積，后來菲羅門也送保護(hù)柱過來了，千把來塊錢，一直放著也沒有用，說句實(shí)話，筆者不是很喜歡用這個(gè)做保護(hù)，原因就在于覺得影響效果。
   
    誤區(qū)四：提高溫度往往有利于分離效果
    否。隨著溫度升高，流動(dòng)相粘度下降，因此分析物傳質(zhì)速率提高，所以就能夠提供更好的色譜分離效果。正確，但是除了柱效，溫度同樣影響保留因子（k）和選擇性（α）。影響因素能夠提高分辨率（其實(shí)這也是色譜分析zui關(guān)心的問題），或者降低分辨率。保留時(shí)間往往隨著溫度升高而降低，因?yàn)闇囟茸鳛橐粋€(gè)熱力學(xué)參數(shù)，使得高溫度下分析物傾向于留在流動(dòng)相中，會(huì)更快的洗脫出來。但是，不同的化合物，也有可能對(duì)于溫度有不同的保留程度改變。以analgesics（一種鎮(zhèn)痛藥，譯者注）為例，圖二。這一系列的色譜圖列出了分析物在柱溫20-90°C的情況。我們從中可以發(fā)現(xiàn)許多特點(diǎn)。首先，所有分析物隨著溫度升高，保留時(shí)間減低且峰變窄，意味溫度升高利于分離效果。其次，salicylic acid（水楊酸即阿司匹林，譯者注）在峰5，6之間，隨著溫度位置改變較大。事實(shí)是在20-40°C時(shí)，該物質(zhì)隨溫度變化，洗脫順序也發(fā)生了變化。所以，溫度大于40°C會(huì)引起分離時(shí)間變短和洗脫順序變化。
   
    當(dāng)然，一個(gè)提高溫度的好處在于降低了操作時(shí)的柱壓，以便于使用更大的柱流量和更細(xì)的填料。
   
    另一個(gè)在高溫下能夠因此柱效的實(shí)驗(yàn)參數(shù)是流動(dòng)相的熱力學(xué)不匹配（互溶問題，譯者注）。如果柱子在60°C下操作，但是流動(dòng)相在室溫流入，那么進(jìn)入的較冷的流動(dòng)相就能夠引起峰變形，原因是不同溫度下分析物會(huì)趨向在高溫的流動(dòng)相中。所以建議大家使用恒溫柱子的時(shí)候一定記得流動(dòng)相要預(yù)熱。
   
     博主注：溫度對(duì)出峰時(shí)間的影響是顯然的，武漢這邊的夏天熱，液相色譜室這邊一般都不愿意把門關(guān)上，所以空調(diào)以往這邊吹，出峰就靠后，waters，agilent 一般沒有配柱溫箱，varian，島津的喜歡推廣這個(gè)，對(duì)于穩(wěn)定保留時(shí)間很有作用。不過我覺得平常的實(shí)驗(yàn)室，流動(dòng)相怎么放，色譜柱也怎么放，不然就像上面說的，流動(dòng)相里的分析物經(jīng)不起溫度的折騰。畢竟不論DAD（PDA）還是UV測(cè)得是濃度，變形了測(cè)得就不太準(zhǔn)了，0.15%很容易突破的。
   
     誤區(qū)五：碳載量越高，反向色譜柱就越好
     否。談到烷基鍵合相是，這樣的結(jié)論肯定是對(duì)于鏈長(zhǎng)、載碳量和表面積等有概念誤解。通常，真正的反向機(jī)理是，保留取決于分析分子的疏水性質(zhì)，所以保留一般取決于載碳量。載碳量越高，保留越長(zhǎng)。載碳量一般與鏈長(zhǎng)對(duì)應(yīng)，但有時(shí)候不是。典型的硅膠反應(yīng)的硅醇含量在8.0 μmol/m2左右，用來鍵合有機(jī)硅試劑。如果對(duì)于一個(gè)每平方米微孔相同的單層鍵合相，給定的表面范圍，鏈長(zhǎng)越長(zhǎng)，載碳量就越大，zui終的結(jié)果是保留與鏈長(zhǎng)一致。但是對(duì)于短鏈鍵合相（比如C8），如果基體變面積大，那么鍵合的碳就會(huì)更多，就會(huì)可能導(dǎo)致比C18更加長(zhǎng)的保留。此外，廠家使用二硅烷和三硅烷，以及聚合物基體也能取得較大的表面積，所以短鏈聚合相就會(huì)在這種情況下帶來單聯(lián)鍵合所不具有的表面積。對(duì)比單體鍵合相，有時(shí)候上述的這些聚合物基體的鍵合表層較薄，引起傳質(zhì)較慢。
   
    高載量的反向柱更加容易坍塌和反潤(rùn)濕。對(duì)于這些柱子，當(dāng)環(huán)境水樣中的機(jī)修飾劑降到10%的時(shí)候，類油的疏水固定相就會(huì)變得自我關(guān)聯(lián)（self-associate），而不是作為極性溶液（即相似相溶）。所以，在此情況下，高碳載量理應(yīng)并不利于反向色譜也不利于色譜重現(xiàn)性。
   
      博主注：賣主子的公司都喜歡談?wù)撨@個(gè)指標(biāo)，什么資生堂，迪馬的柱子在介紹的時(shí)候碳載量是放在顯著的位置的。平心而論，碳載高的柱子制造難度大，同時(shí)分析我手上小分子的時(shí)候還真是好些，目前還沒有發(fā)現(xiàn)碳載高的柱子塌掉的情況，可能做的還不夠多吧。
   
    誤區(qū)六：使用小粒徑的分析效果好
    否。對(duì)于一個(gè)裝填的色譜柱而言，隨著裝填粒徑的減小，柱效提高，但是如果附加柱（應(yīng)該指保護(hù)柱，或者冗長(zhǎng)的管路系統(tǒng) 譯者注）對(duì)色譜系統(tǒng)對(duì)譜帶展寬影響足夠明顯，那么，色譜柱的粒徑影響就不容易發(fā)覺。這些附加柱效應(yīng)影響列舉如下：
    1. 進(jìn)樣體積，包括進(jìn)樣環(huán)，以及進(jìn)樣閥的額外體積
    2. 管路體積，包括從進(jìn)樣閥（器）出口到色譜柱入口
    3. 保護(hù)柱的間隙和適配器
    4. 在線過濾器體積
    5. 色譜柱入口到色譜填料之間的一段距離的體積
    6. 色譜柱間隙體積
    7. 色譜柱色譜填料到出口的一段距離的體積
    8. 色譜柱出口到檢測(cè)器入口的管路體積
    9. 檢測(cè)器入口到流通池的管路體積
    10. 流通池體積
    上述均為附加體積（就是死體積，介紹的比較全面 譯者注）。因此，能夠做的就是把進(jìn)樣量zui小化，保持色譜柱入口前的管路盡可能短，內(nèi)徑盡可能小。如果色譜柱出口到檢測(cè)器的管路合計(jì)1米長(zhǎng)，內(nèi)徑0.5mm，譜帶展寬就會(huì)*影響色譜分離效果。所以，想要在小于2μm或者1.0mmde 微孔柱上得到好的效果，就要要保持“附加柱”盡可能的短。
    博主注：與其使用更好的柱子，還不如優(yōu)化下色譜體系。每每拿到柱子就看一下柱子驗(yàn)證報(bào)告，不論是國(guó)內(nèi)廠商，還是老美，這個(gè)報(bào)告我都是深信不疑的，如果拿了同樣的標(biāo)樣做不出來，那zui可能的原因就是系統(tǒng)沒有優(yōu)化。人家出廠測(cè)試的時(shí)候，管路都是盡可能的短，盡可能的細(xì)，流動(dòng)相是盡可能的純，沒法比，但至少自己優(yōu)化了比沒有優(yōu)化還是有區(qū)別的。

   
    誤區(qū)七：對(duì)于硅膠填料，硅醇基是拖尾的原因
    否。在特定場(chǎng)合，出現(xiàn)在硅膠基鍵合柱上的硅醇基，尤其是分析堿性化合物，能夠造成拖尾。拖尾的原因在于硅醇基團(tuán)就是一個(gè)弱酸，pKa大約在4.5和4.7之間。因此如果流動(dòng)相pH值在4到5的時(shí)候，硅醇就會(huì)離子化，與正電荷分子離子反應(yīng)，比如通過靜電作用于氨基的H反應(yīng)（Si-O-----H-N 譯者注）。該反應(yīng)可以通過減小pH到3阻止離子化來減小。但是對(duì)于許多堿性化合物，在低pH條件下也能夠發(fā)生拖尾。而對(duì)于堿性化合物的拖尾，要得到好的峰形，就需要特別設(shè)計(jì)的反向色譜柱了。
    三種原因能夠造成拖尾，化學(xué)問題（之前已經(jīng)討論過），柱填充問題，色譜設(shè)備硬件問題。三種問題都可以造成拖尾，但是要解決問題，就需要找到問題的根源。詳細(xì)的討論需要千言萬語(yǔ)，所以這里就只給出解決問題的大概方向。首先，與硅醇基的反應(yīng)問題，化學(xué)因素的拖尾能夠用多種方式表現(xiàn)出來。早期色譜柱，可以發(fā)現(xiàn)金屬螯合劑能夠和柱子中痕量金屬反應(yīng)。因此，錯(cuò)誤的進(jìn)樣溶劑就能夠?qū)е峦衔?/span>（-CN 螯合，譯者注）。使用比流動(dòng)相強(qiáng)的溶劑進(jìn)樣也能夠?qū)е路迮で?/span>（如甲醇配樣，乙腈做流動(dòng)相 譯者注）。拖尾還可能來自于柱頭處，樣品中不容易洗脫出的物質(zhì)，和流動(dòng)相的雜質(zhì)。這些物質(zhì)能夠與不同的固定相反應(yīng)，然后在分析物經(jīng)過的時(shí)候發(fā)生影響（雜質(zhì)占位，不保留 譯者注）。流動(dòng)相混合模式偶爾也能夠誘發(fā)拖尾（應(yīng)該指的是四元單泵 譯者注）。分析物與固定相作用，離子化合物與活性基體作用。有時(shí)候，流動(dòng)相pH錯(cuò)誤，樣品部分離子化，就能夠?qū)е路迮で屯衔?。此外，色譜背景峰上的小峰，看上去也有點(diǎn)拖尾。
    柱子的填充質(zhì)量也可以導(dǎo)致拖尾。柱頭的填料空隙可以導(dǎo)致分叉或者拖尾。如果柱子沒有填充好，有凹槽（可以是硅膠上的小洞， 譯者注）就能夠因此峰形過寬。樣品含量過大會(huì)導(dǎo)致拖尾（一般是后拖前不拖）。如果進(jìn)得少了，因?yàn)橹由线^度的硅醇反應(yīng)，也能夠?qū)е峦衔病?/span>
    第三個(gè)來討論下儀器硬件問題。前面說的管路死體積（extracolume）和接頭體積能夠?qū)е峦衔?。進(jìn)樣口的瞬間加壓可以造成柱子和流動(dòng)相之間的空洞從而加劇拖尾。反應(yīng)比較慢的檢測(cè)器用來檢測(cè)快速洗脫出的分析物時(shí)會(huì)形成峰展寬和拖尾（和流通池厚度，長(zhǎng)度有關(guān) 譯者注）。前文中說的柱操作溫度和流動(dòng)相溫度不匹配自然也會(huì)引起。
    所以，造成HPLC拖尾的不總是硅醇基。
    博主注：液相色譜天生的峰就寬，比不上GC或者電泳，看著就羨慕，誰(shuí)叫它是靠壓力在水里走呢？柱子里走的路徑不同，還有空隙里中間快，靠邊的慢，相比之下，就是正常的峰形，都覺得有些拖。把硅醇封端不光是為了防拖尾，還有個(gè)作用就是防坍塌，用個(gè)小基團(tuán)在C18、C8后面頂著，柱子也耐用一些。
   
    誤區(qū)八：硅膠填料只能夠在pH2到7使用
    通常有兩種HPLC反向柱的化學(xué)退變機(jī)理：在低于pH2的時(shí)候硅氧鍵催化水解；在pH大于7或8的時(shí)候，被水中-OH溶解。pH小于2的時(shí)候，-Si-O-Si-可以被H3O+進(jìn)攻，固定相就會(huì)流失斷裂。隨著時(shí)間的推移，隨著載碳量下降保留值會(huì)慢慢下降。這種情況在由*基硅烷等短鏈封端的色譜柱時(shí)，應(yīng)當(dāng)尤為注意。長(zhǎng)鏈C18固定相因?yàn)榭臻g位柱效應(yīng)，對(duì)于這樣一種流失有一定的保護(hù)作用，但是zui終仍然是慢慢被侵蝕，尤其是溫度高于環(huán)境時(shí)?？臻g保護(hù)、密度圖層鍵合固定相有助于防止硅膠鍵合相的流失。聚合物固定相在這種條件下表現(xiàn)良好，但是比起硅膠固定相的柱效要低。
    在高pH方面，一定需要有保護(hù)硅膠基體免于羥基進(jìn)攻的措施。一旦溶解過程開始，隨著固定相被掏空，色譜柱會(huì)zui終失效。所以開發(fā)了雙硅烷交聯(lián)C18（bidentate C18），雜交等耐高pH的特種色譜柱。這些柱子都使用了化學(xué)方法來保護(hù)固定相避免羥基的洗脫。上述的特種柱子能夠承受pH11-12的條件。在此堿性，pH條件下，柱子要避免高溫使用。當(dāng)然，聚合物色譜柱能夠在pH13甚至14的條件下使用，但是，前文已經(jīng)指出，聚合物柱比硅膠柱效果要差些。
     因此，在這個(gè)論點(diǎn)上，硅膠柱能夠在pH2-7以外的范圍使用，但是普通硅膠色譜柱要格外小心，由其是在高溫條件下。
    博主注：再一次提醒自己，pH的使用是液相色譜的精髓之一。怎么調(diào)節(jié)，物質(zhì)在等pKa的pH條件下出峰時(shí)間中等，堿性在高于pKa，酸性低于pKa時(shí)保留時(shí)間延長(zhǎng)，峰形也漂亮，反之出峰快，峰形不好說。除了這個(gè)，估計(jì)什么都要靠運(yùn)氣了。
       
    誤區(qū)九：當(dāng)代HPLC柱至少應(yīng)該承受1000次進(jìn)樣
   否。現(xiàn)代HPLC色譜柱能夠承受的進(jìn)樣數(shù)量由許多因素決定。有些因素基于以下模式：反相色譜，離子交換色譜，排阻色譜，正相色譜，手性色譜，親水交互色譜等等。有些因素基于不同的填料基體：硅膠基質(zhì)，雜交基質(zhì)，氧化皓基質(zhì)，聚合物基質(zhì)等填料，或者是基于不同的硅膠軟硬程度和涂層的交聯(lián)程度。有些因素基于固定相本身：空隙率，鍵合方式，聚合，單層鍵合，或者包埋方式。其他的因素就和條件有關(guān)了：pH，溫度，流動(dòng)相組分，緩沖組成，流動(dòng)速率，壓力等等。還有些和樣品有關(guān)：*標(biāo)樣，潔凈樣品，樣品pH，樣品體積（含量），樣品雜質(zhì)，分析物分子本身特性等。
  　如果一根柱子被濫用，比如在pH范圍外，或者流速范圍外，很有可能連50次進(jìn)樣都成問題。如果每次樣品都沒有什么雜質(zhì)，5000次使用也不為過。如果色譜柱不總是在其承受力上限使用，壽命會(huì)更長(zhǎng)。如果柱子進(jìn)入多種多樣的樣品，但是從來不沖洗柱子里的殘留，壽命必然減少。
    筆者（原作者 譯者注）對(duì)于許多制藥公司的經(jīng)驗(yàn)表明，絕大多數(shù)5μm反向色譜柱在分析物質(zhì)結(jié)構(gòu)，簡(jiǎn)單藥品混合物，和標(biāo)樣的情況下能夠承受至少1000次測(cè)試。如果樣品“很臟”，比如沒有嚴(yán)格*的凈化生物樣品提取物，環(huán)境樣品提取物，1000次進(jìn)樣是有待考驗(yàn)的。
    所以說柱子能夠承受的次數(shù)不是的，而是取決于柱子的類型（本身體質(zhì)和適用范圍 譯者注），操作條件，樣品潔凈程度和濫用程度。即使有些儀器能夠記錄柱子的使用，實(shí)際上只有不到15%的研究人員記錄了色譜柱能夠用的次數(shù)，很多研究人員都不知道到底能夠用多少次
   博主注：用儀器的都知道要保養(yǎng)，奈何就是有人把過粘，過臟的東西一針一針的往里打，這樣的慘劇博主不是*次見了：純的油質(zhì)，黃黑色的，20μL，卡嚓一針進(jìn)了六通閥；50uL當(dāng)5uL的針裝在自動(dòng)進(jìn)樣器上，不設(shè)延遲時(shí)間，直接卡嚓往GCMS里面搞，還要不要儀器了，要不要人活。所以說，樣品要接近，溶劑要過膜超聲。
     
    誤區(qū)十：色譜柱總是應(yīng)該緊緊的密封，以防被填料被空氣破壞
   否。通常色譜柱兩頭的小孔不到0.5mm，所以如此小的區(qū)域，空氣進(jìn)入色譜和流動(dòng)相蒸發(fā)很小。即使是一個(gè)小氣泡進(jìn)入色譜柱，也不能夠有足夠時(shí)間來進(jìn)入填料床，接觸足夠的固定相而造成損害。假若柱子中有了這么個(gè)小的氣泡，只要裝在色譜設(shè)備上運(yùn)行一次，在高壓下會(huì)立即溶解，然后流出色譜柱，不會(huì)有任何危害。當(dāng)然，如果你為了保險(xiǎn)，死死的擰緊也行。柱子也都配備了螺紋柱塞（原文是 male compression fitting caps, 英文的這個(gè)傳神，翻譯不出來那個(gè)感覺，罷了 譯者注），手動(dòng)就能夠擰緊，以防止溶劑蒸發(fā)，空氣進(jìn)入填料。

    博主注：原文那個(gè)“male compression fitting caps”形象的不行，男人干的活。實(shí)驗(yàn)室里的小mm每當(dāng)要換柱子的時(shí)候，就是我等展現(xiàn)男人魅力的時(shí)候了，不論是用扳手?jǐn)Q金屬頭，還是用手?jǐn)Qpeek頭，都不在話下，哪怕是柱頭在高壓下，噴的到處都是。至于用完的柱子，還是老老實(shí)實(shí)把C18要水和乙腈混著，原裝的peek頭擰緊，原文指的是在運(yùn)行的時(shí)候松緊問題。