細(xì)胞培養(yǎng)-培養(yǎng)細(xì)胞的取材

    人和動(dòng)物體內(nèi)絕大部分組織都可以在體外培養(yǎng)，但其難易程度與組織類(lèi)型、分化程度、供體的年齡、原代培養(yǎng)方法等有直接關(guān)系，原代取材是進(jìn)行組織培養(yǎng)的*步。

  取材的基本要求

   （1）取材的組織盡快培養(yǎng)。因故不能即時(shí)培養(yǎng)，可將組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi)，放置于冰浴或4度冰箱中。如果組織塊很大，應(yīng)先將其切成1cm3以下的小塊再低溫保存，但時(shí)間不能超過(guò)24h。

   （2）取材時(shí)應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，用無(wú)菌包裝的器皿或用事先消毒好的，帶少許培養(yǎng)液的小瓶等便于攜帶的物品取材，取材過(guò)程中要盡量避免紫外線(xiàn)照射和接觸化學(xué)試劑如碘、汞等。從消化道、周?chē)袎乃澜M織等污染因素存在的區(qū)域取材時(shí)，為減少污染，可用含500~1000單位/ml的青鏈霉素BSS液漂洗5~10min,或用10%達(dá)克寧注射液沖洗浸泡10min再做培養(yǎng).

   （3）取材和原代培養(yǎng)時(shí),要用鋒利的器械如刮臉刀片切碎組織,盡可能減少對(duì)細(xì)胞的機(jī)械損傷.

   （4）對(duì)于血液.脂肪.神經(jīng)組織.結(jié)締組織和 壞死組織,取材時(shí)要細(xì)心出去,修剪和切碎過(guò)程中,為避免組織干燥,可將其浸泡于少量培養(yǎng)液中.

   （5）原代培養(yǎng),特別是正常細(xì)胞的培養(yǎng),應(yīng)采用營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)液,添加胎牛血清,含量為10%~20%為宜.

   （6）一般來(lái)講,胚胎組織較成熟個(gè)體的組織容易培養(yǎng),分化底的較分化高的組織容易生長(zhǎng),腫瘤組織較正常組織容易培養(yǎng).如無(wú)特殊要求,可采用易培養(yǎng)的組織進(jìn)行培養(yǎng),成功率較高.

   （7）為了便于以后鑒別原代組織的來(lái)源和觀察細(xì)胞體外培養(yǎng)后與原組織的差異性,原代取材時(shí)要同時(shí)留好組織學(xué)標(biāo)本和電鏡標(biāo)本.對(duì)組織的來(lái)源.部位.包括供體的一般情況要做詳細(xì)的記錄,以備以后查詢(xún).

    取材的基本器材和用品

   （1）眼科組織剪.彎鑷.手術(shù)刀（用前消毒）

   （2）裝有無(wú)血清培養(yǎng)基或Hank's液的小瓶

   （3）小燒杯（10ml,50ml）

   （4）培養(yǎng)皿（特殊用途物品詳見(jiàn)后面章節(jié)）

    皮膚和粘膜的取材

   皮膚和粘膜是上皮細(xì)胞培養(yǎng)的重要組織來(lái)源.一般皮膚黏膜主要取自手術(shù)過(guò)程中切除的部分組織,如特殊需要也可酌情單獨(dú)取材.方法似外科取斷層皮片手術(shù)的操作,但面積一般2~3mm2即可.這樣局部*痕.注意取材時(shí)不要用碘酒消毒.

    皮膚黏膜培養(yǎng)多是以獲取上皮細(xì)胞為目的,因而無(wú)論何種方法取材都不要切取太厚并要盡可能去除所攜帶的皮下或者黏膜下組織.如欲培養(yǎng)成纖維細(xì)胞則反之,皮膚.粘膜分布在機(jī)體外部或與外界相通的部位,故表面細(xì)菌.霉菌很多.取材時(shí)要嚴(yán)格消毒,必要時(shí)用較高濃度的 抗菌素溶液漂洗.

     內(nèi)臟和實(shí)體瘤的取材

   人和動(dòng)物體內(nèi)所發(fā)生的腫瘤及各臟器是較常用的培養(yǎng)材料.內(nèi)臟除消化道外基本是無(wú)菌的,但有些實(shí)體瘤有壞死并向外破潰者可能被細(xì)菌污染.內(nèi)臟和實(shí)體瘤取材時(shí),一定要明確和熟悉自己所需要組織的類(lèi)型和部位,要去除不需要的部分如血管.神經(jīng)和組織間的結(jié)締組織,取腫瘤組織時(shí)要盡可能取腫瘤細(xì)胞分布較多的部分,避開(kāi)壞死液化部分.但有些復(fù)發(fā)性.浸潤(rùn)性較強(qiáng)的腫瘤較難取到較為純凈的瘤體組織,其腫瘤組織與結(jié)締組織混雜在一起,培養(yǎng)后會(huì)有很多纖維細(xì)胞生長(zhǎng),給以后的培養(yǎng)工作增加困難.對(duì)于一些特殊細(xì)胞培養(yǎng)的取材,詳見(jiàn)以后的介紹 。

    血液中的白細(xì)胞是很常用的培養(yǎng)材料,常用于進(jìn)行染色體分析.淋巴細(xì)胞體外激活進(jìn)行免疫治療等.一般多采用靜脈取血,微量時(shí)也可以從指尖或耳垂取血.為防止凝血重用肝素抗凝劑,抗凝劑的量以產(chǎn)生抗凝效果的zui小量為宜,量過(guò)大易導(dǎo)致溶血.肝素常用濃度為20U/ml,抽血前針管也要用濃度較高的肝素（500U/ml）濕潤(rùn).抽血時(shí)要嚴(yán)格無(wú)菌.

    骨髓.羊水.胸水.腹水內(nèi)細(xì)胞的取材

   要根據(jù)各種有關(guān)操作規(guī)程進(jìn)行.詳見(jiàn)以后的章節(jié).這幾種樣品取材后一般不需要其它處理,離心后立即培養(yǎng),不易低溫保存.

     鼠胚組織的取材

    由于鼠胚組織取材方便,易于培養(yǎng),同時(shí)與人類(lèi)相近都是哺乳類(lèi)動(dòng)物,已成為較常用的培養(yǎng)材料.因?yàn)樾∈蟮拿须[藏微生物較多,而且不易消毒.所以取材時(shí)更要注意無(wú)菌消毒,其無(wú)菌消毒一般采用以下方法進(jìn)行:首先用引頸法殺死動(dòng)物,然后將其整個(gè)浸入盛有75%酒精的燒杯中5min,注意時(shí)間不能太長(zhǎng)以免酒精從口和其它孔道進(jìn)入體內(nèi),影響組織活力.取出后放在消毒過(guò)的小木板上,用消毒過(guò)的圖釘或大頭釘將其固定.然后用眼科剪和止血鉗剪開(kāi)皮膚解剖取材.也可在酒精消毒后,在動(dòng)物軀干中部環(huán)形剪開(kāi)皮膚,用止血鉗分別挾住兩側(cè)皮膚拉向頭尾把動(dòng)物反包,暴露軀干,然后在固定解剖 取材.區(qū)號(hào)的組織要放置在另一干凈的平皿中或玻璃板上進(jìn)行原代培養(yǎng)操作.動(dòng)物消毒后的操作宜在超凈臺(tái)內(nèi)或無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行.