日立高新應對培養(yǎng)基中含二肽（丙氨酰谷氨酰胺）氨基酸的測定

     細胞培養(yǎng)所必需的L－谷氨酰胺在水溶液中性質(zhì)不穩(wěn)定，分解后會生成對細胞有害的氨。已知氨能夠抑制細胞的生長及目標物的生成，于是人們開始使用L－丙氨酰－L－谷氨酰胺（丙氨酰谷氨酰胺、Ala-GluNH2）來代替L－谷氨酰胺。丙氨酰谷氨酰胺是L－丙氨酸和L－谷氨酰胺縮合而成的二肽，在水溶液中的穩(wěn)定性高，不易生成氨，因此可以進行更長時間的培養(yǎng)。
    在此，我們將介紹使用L-8900型高速全自動氨基酸分析儀，對包括丙氨酰谷氨酰胺在內(nèi)的42個氨基酸成分進行測定的例子。本例中，我們分別采取生理體液分析和高分離度生理體液分析雙柱聯(lián)用方式進行了測定，同時還將介紹添加了丙氨酰谷氨酰胺的培養(yǎng)基測定例。
 
■標準樣品與培養(yǎng)基的測定例（使用生理體液分析柱）
 
分析條件

氨基酸標準溶液測定例

氨基酸標準溶液測定例（各2 nmol/20 μL（部分成分除外）） 

 

樣品前處理

 
添加了Ala-GluNH2的培養(yǎng)基的測定例 

添加了Ala-GluNH2的培養(yǎng)基的測定例（前處理后進樣20 μL）

   使用生理體液分析柱對42個氨基酸成分進行了測定。在標準分析方法中，Ala-GluNH2的出峰位置與Cys重疊，但對梯度程序進行了優(yōu)化后，便可以分離出Ala-GluNH2的峰，從而可以與其他氨基酸一樣對該二肽進行定性和定量分析。
 
■標準樣品與培養(yǎng)基的測定例（高分離度生理體液分析雙柱聯(lián)用）
 
分析條件
 

 
氨基酸標準溶液測定例

氨基酸標準溶液測定例（各2 nmol/20 μL（部分成分除外））
 

樣品前處理
 

 
添加了Ala-GluNH2的培養(yǎng)基的測定例

添加了Ala-GluNH2的培養(yǎng)基的測定例（前處理后進樣20 μL）

    如果采用高分離度生理體液分析雙柱聯(lián)用，可以進行更高分離度的測定。由于雙柱聯(lián)用可以通過將兩根色譜柱串聯(lián)的結構對壓力進行分散，因此能夠?qū)崿F(xiàn)高速、高分離度的分析。這樣不僅可以*分離Val 和Ala-GluNH2，而且還能夠改善中間洗脫出的Ile、Leu、Tyr的峰形，實現(xiàn)更高精度的定量分析。

氨基酸成分名列表



本例使用日立L-8900全自動氨基酸分析儀進行測定，關于此儀器請參考：http://www.instrument.com.cn/netshow/SH102446/C138114.htm

關于日立高新技術公司:

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