液相色譜儀（HPLC）檢測飼料中L-肉堿方案

液相色譜儀(HPLC)檢測飼料中L-肉堿方案

旋肉堿（L-肉堿）又稱肉毒堿，是一種水溶性氨基酸，由賴氨酸衍生而來。分子結(jié)構(gòu)為L-γ-*胺β-羥丁酸，分子式為C7H16NO3，分子量為161.2。它是B族維生素類似物，曾被稱為維生素BT。其分子結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)可供脂肪酸脂化的羥基，其飽和鍵和極性官能團(tuán)有良好的水溶性和吸濕性，200℃以上它仍穩(wěn)定存在，可在PH3~6的溶液中放置一年以上而不變壞。1998年我國衛(wèi)生部將L-肉堿批準(zhǔn)為食品添加劑，列入營養(yǎng)強(qiáng)化劑類。

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　　以下是飼料中L-肉堿的詳細(xì)檢測方法。

1　 儀器與試劑

1.1 儀器
　　液相色譜儀
　　液相色譜柱　C18  250mm×4.6mm×5μm
　　實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備
　　超聲波水浴
　　分析天平（感量0.001g）
　　0.45μm水性濾膜

1.2 試劑  
　　異丙醇，色譜純。
　　甲醇，色譜純。
　　乙腈，色譜純。
　　磷酸氫二鈉。
　　磷酸二氫鉀。
　　三乙醇胺。
　　檸檬酸。
　　氧化銀。
　　肉堿衍生劑。

2 　測定原理
　　樣品經(jīng)加乙醇超聲提取后，然后加入肉堿衍生劑，將衍生物注入液相色譜反相柱上進(jìn)行分離，用紫外檢測器在210nm波長處定量測定。

3 　試樣溶液的制備
　　稱取5g試樣于100ml燒杯中，加入30ml無水乙醇，溶解并轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，先后用10ml無水乙醇分3次洗滌燒杯，樣液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，超聲提取10min后用無水乙醇定容至刻度，混勻后于4000r/min離心5min。取上清液2ml，加入肉堿衍生劑0.25ml（衍生劑配制方法：40 mg P-苯酰溴溶解于1.0 ml乙腈，加入40% 氫氧化四丁基銨50 µl），混合后置于60℃恒溫水溫箱120 min，吸取20 µl進(jìn)樣分析。

4　 色譜條件
　　色譜柱：C18柱　250mm×4.6mm×5μm；
　　流動相：甲醇：磷酸鹽=5:95
　　流速：1.0mL/min；
　　溫度：室溫；
　　進(jìn)樣量：20μL；
　　檢測波長：210nm。

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