免疫組化切片染色ABC Kit

簡(jiǎn)介：

Santa 公司免疫組化染色ABC kit 適用于兔、山羊、小鼠、大鼠來(lái)源的一抗冰凍切片或石蠟切片顯色，一個(gè)盒子足夠染200張切片。

產(chǎn)品信息：

試劑盒組成：(以ImmunoCruzT^M mouse ABC Staining System 為例)

1. 1ml正常封閉血清
2. 250ug 生物素標(biāo)記的二抗
3. 0.5ml親和素標(biāo)記HRP（AB試劑）
4. 1ml 50X過(guò)氧化物酶底物
5. 1ml 50X DAB顯色液
6. 3ml 10 X底物緩沖液
7. 用于工作液制備的小瓶

客戶(hù)需自備的試劑：

1. PBS緩沖液
2. 0.1-1%雙氧水，溶于PBS、雙蒸水或甲醇
3. 一抗
4. 樣品固定試劑
5. 復(fù)染試劑（可選的）
6. 封片劑

操作流程：

所有步驟均在室溫操作，用足夠的試劑浸潤(rùn)切片，一般100ul足夠或1-3滴工作液，避免在操作過(guò)程中樣本變干。

1. （可選步驟）切片制備好以后，切片需用0.1-1%的過(guò)氧化氫（溶于PBS，去離子水或甲醇）孵育5-10min，以去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。用PBS沖洗兩次，5min/次
2. （可選步驟）切片用1.5%封閉血清（溶于PBS）孵育1h,如果沒(méi)有出現(xiàn)非特異性染色，該步驟可省略。
3. 切片用一抗室溫孵育30min或4℃孵育12h。通過(guò)滴定法確定*的一抗稀釋度，推薦范圍：0.5-5ug/ml，用1.5%封閉血清（溶于PBS）。PBS洗滌3次，5min/次
4. 用生物素標(biāo)記的二抗孵育切片30min，二抗?jié)舛燃s1ug/ml，PBS洗滌3次，5min/次
5. 用AB酶試劑，孵育切片30min, PBS洗滌3次，5min/次
6. 用過(guò)氧化物酶底物溶液1-3滴孵育切片30s-10min或直至強(qiáng)顯色出現(xiàn)。如果需要的話，加入更多的過(guò)氧化物酶底物溶液，繼續(xù)孵育，用去離子水洗滌5min。
7. (可選步驟) 蘇木精復(fù)染5-10s，用去離子水洗滌數(shù)次。
8. （可選步驟）用酸乙醇脫色，染成藍(lán)色，水沖洗。
9. 對(duì)于石蠟包埋組織，用以下方法脫水：a.2 x 95%10s，2x100%乙醇10s，3x二甲苯10s。去除多余的二甲苯
10. 立即加入1-2滴封片劑，蓋上蓋玻片，顯微鏡觀察。