做ELISA試劑盒實驗已是輕車熟路了

做ELISA試劑盒實驗已是輕車熟路了

    ELISA試劑盒檢測系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為敏捷的技術(shù)手段。自己也為此苦惱過很長一段時間，跟著自己技術(shù)水平得進(jìn)步，或多或少地也把握了ELISA試劑盒體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現(xiàn)在做方陣，以前檢測一種抗體用整整一下戰(zhàn)書還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個八個的從包被到顯色，一個工作日基本搞定。ELISA試劑盒可是在新老手操縱過程中老是會泛起或大或小的題目，本人在剛開始做ELISA試劑盒時就面對良多災(zāi)題，固然有師兄師姐鋪路，但仍是經(jīng)常做得烏煙瘴氣，好比說花板，假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空缺還低。

    常用封鎖劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。詳細(xì)的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，ELISA試劑盒看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗當(dāng)中去。但*選用什么，要依據(jù)試驗詳細(xì)來實踐。

    包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保留抗原很重要，我做重組蛋白時，ELISA試劑盒師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。封鎖就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑，從而排斥ELISA試劑盒后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時因為ELISA試劑盒試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，ELISA試劑盒親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法平均、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量ELISA試劑盒測定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。