Thermo HPLC對雞肉中利巴韋林檢測

      近日，*頻道對于速成雞事件的報(bào)道，讓眾多食品企業(yè)卷入風(fēng)波中。據(jù)節(jié)目透露，山東一些養(yǎng)雞場違規(guī)使用抗生素和激素來養(yǎng)殖肉雞，當(dāng)?shù)匾恍B(yǎng)殖戶違規(guī)喂食金剛烷胺、利巴韋林等抗病毒等藥品，有些養(yǎng)殖戶給肉雞喂食地塞米松等激素類藥品，使肉雞能夠在40天長到5斤重。
     上述違法添加的藥物給廣大消費(fèi)者的健康造成隱患，各有關(guān)部門迅速展開違法添加藥物的檢測。所有添加的藥物中，以利巴韋林的檢測zui為復(fù)雜。賽默飛世爾科技作為服務(wù)科學(xué)的，為利巴韋林分析提供從前處理到儀器檢測的、準(zhǔn)確的方法，為廣大客戶提供給*的支持。

一、 樣品前處理方法
        2g雞肉，加入15mL水，渦旋混勻，超聲提取10min，2000xg離心5min，取3mL上清進(jìn)行固相萃取，固相萃取柱為HyperSep HyperCarb 色譜柱(200mg/3mL，貨號60106-301)，固相萃取步驟如下：
        活化：1mL 乙腈，1mL乙醇，負(fù)壓過柱
        上樣：3mL 上清液，1mL/min速率過柱
        洗脫：500μL 20%乙腈-水溶液洗脫，1mL/min
        洗脫兩次，合并洗脫液，直接進(jìn)行LC-MS/MS分析。
二、 樣品分析方法
1. 儀器
       Accela HPLC；TSuantum Access MAX 三重串聯(lián)四級桿質(zhì)譜檢測器；Hypercarb 液相色譜柱(100x2.1mm，5μm，貨號35005-102130)。
2. 參數(shù)設(shè)置
    液相參數(shù)：
            柱溫：室溫
            進(jìn)樣量：10μL
            梯度：

質(zhì)譜參數(shù)：

        離子化模式：電噴霧電離，正離子模式；

        質(zhì)譜掃描方式：選擇反應(yīng)監(jiān)測（SRM）；

        分辨率：單位分辨率；

        毛細(xì)管溫度：350℃；

        霧化溫度：350℃；

        噴霧電壓：3700V；

        鞘氣壓力：30 arb；

        輔助氣流速：10 arb；

        碰撞氣壓力：1.0 mTorr；

        離子對參數(shù)見下表：

3.色譜圖

圖 1  雞肉加標(biāo)樣品檢測結(jié)果(利巴韋林濃度，1ppb；同位素內(nèi)標(biāo)濃度：1ppb)

三、 結(jié)果與討論
        利巴韋林為強(qiáng)極性化合物，使用水作為溶劑即可將其*提取。但常規(guī)色譜柱無法將其保留。Hypersep Hypercarb是Thermo Scientific*的固相萃取填料，基質(zhì)為具有平面結(jié)構(gòu)的多孔石墨化碳（PGC），能與極性化合物產(chǎn)生偶極-偶極相互作用而使其具有強(qiáng)保留性質(zhì)，特別適合極性化合物的純化。
        本實(shí)驗(yàn)中，使用HyperSep Hypercarb 進(jìn)行樣品的純化，可以得到滿意的回收率，在50ppb的加樣回收試驗(yàn)中，回收率為121.8%，重現(xiàn)性良好。且方法簡單，與現(xiàn)有方法相比，避免了反復(fù)調(diào)節(jié)pH值的步驟。而且，使用20%乙腈即可將目標(biāo)物洗脫，避免在后繼的分析過程中產(chǎn)生明顯的溶劑效應(yīng)。
        在分析過程中發(fā)現(xiàn)，利巴韋林色譜峰附近容易出現(xiàn)干擾物質(zhì)，根據(jù)文獻(xiàn)判斷，可能為內(nèi)源性的異構(gòu)體。該異構(gòu)體容易使結(jié)果出現(xiàn)假陽性，但使用HyperCarb色譜柱，在極為簡單的流動(dòng)相條件下，即可實(shí)現(xiàn)分離。