核蛋白提取試劑盒說(shuō)明書(shū)

核蛋白提取試劑盒說(shuō)明書(shū)
貨號(hào)：R0050
規(guī)格：50T/100T
產(chǎn)品內(nèi)容：漿蛋白抽提試劑、核蛋白抽提試劑、PMSF;
保存：核/漿蛋白抽提試劑4℃保存，PMSF于-20 ℃保存。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個(gè)過(guò)程只需約60 分鐘
就可以將核蛋白和漿蛋白從細(xì)胞中分離出來(lái)。得到的蛋白可以用于Western blot 等實(shí)驗(yàn)。本試劑盒通過(guò)漿蛋白
抽提試劑使細(xì)胞膨脹破裂，釋放出胞漿蛋白，再通過(guò)離心得到細(xì)胞核。然后通過(guò)核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)
胞核蛋白。本試劑盒可以抽提50/100 個(gè)樣品（每個(gè)樣品約2×106 個(gè)Hela 細(xì)胞，40mg）。
操作?法：
裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
一、對(duì)于體外培養(yǎng)細(xì)胞：
1．根據(jù)用量取適當(dāng)?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入PMSF，使PMSF 的終濃度為1mM。PMSF
需現(xiàn)用現(xiàn)加，若目標(biāo)蛋白含有豐富的半胱氨酸，可以在兩種蛋白抽提液中加入DTT 至終濃度0.5mM。
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用PBS 洗一遍，用細(xì)胞刮刀收集細(xì)胞，或用EDTA 消化后吹打下細(xì)胞（
好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。500 g 離心2～3 分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清留下沉淀備用。
3．對(duì)于懸浮細(xì)胞：用PBS 洗一遍，500 g 離心2～3 分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清，留下細(xì)胞沉淀備用。
4．每20ul 細(xì)胞沉淀加入200ul 漿蛋白抽提試劑（2×106 個(gè)細(xì)胞沉淀約20ul 或40mg）。
5．用移液器吹打或高速渦旋15 秒（可適當(dāng)延長(zhǎng)），必須使細(xì)胞沉淀*分散開(kāi)成單細(xì)胞懸液。細(xì)胞沉淀分散
不*會(huì)導(dǎo)致蛋白產(chǎn)量降低。
6．冰浴10 分鐘。
7．高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10 秒，4℃ 12000～16000g 離心10 分鐘。
8．上清即為抽提得到的細(xì)胞漿蛋白，立即吸取上清至預(yù)冷的樣品管中備用，進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western 等
實(shí)驗(yàn)，但蛋白濃度較低，可根據(jù)需要進(jìn)行相應(yīng)濃縮。
9．沉淀即為細(xì)胞核，要*吸盡殘余的上清（避免細(xì)胞漿蛋白的污染），加入50-100ul 核蛋白抽提試劑。
10．用移液器吹打或高速渦旋15 秒（可適當(dāng)延長(zhǎng)）至沉淀*分散，冰浴10 分鐘。
11．高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10 秒，4℃12000～16000g 離心10 分鐘。
12．立即吸取上清至預(yù)冷的樣品管中，此即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白?？蛇M(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-70℃凍存。
對(duì)于組織樣品：
把組織稱重后，盡可能切成非常細(xì)小的碎片，按每50mg 組織加入200ul-500ul PBS，用勻漿器冰上勻漿
制成細(xì)胞懸液，500 g 離心2～3 分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清，收集沉淀。加入200ul 漿蛋白抽提試劑后接上述
試劑盒組成 50T 100T
漿蛋白抽提試劑 25ml 50ml
核蛋白抽提試劑 5ml 10ml
PMSF 300ul 1ml
Solarbio
Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd

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步驟5。
注意事項(xiàng)：
1．裂解得到的蛋白樣品，由于含有較高濃度的去垢劑干擾，不能用Bradford 法測(cè)定蛋白濃度，可以選用本公
司生產(chǎn)的BCA 蛋白定量試劑盒(貨號(hào)PC0020)測(cè)定蛋白濃度。
2．對(duì)于組織樣品，本試劑盒適用于新鮮組織，對(duì)凍存組織抽提效果較差。
3．為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
相關(guān)產(chǎn)品：
P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M
P1010 4×蛋白上樣緩沖液（含β-巰基乙醇）
S1010 10% SDS
PR1400 低分子量蛋白MARKER
PC002 BCA 法蛋白濃度測(cè)定試劑盒
PC0030 Lowry 法蛋白濃度測(cè)定試劑盒