標記抗體的免疫放射技術（IRMA）

（一）原理

IRMA是采用過量的標記抗體與待測抗原的非競爭性結合反應，然后加入固相的抗原吸附劑以結合游離的標記抗體，離心去沉淀，測定上清液中的放射性強度，從而推算出待測樣品的抗原含量。

（二）放射免疫檢測與免疫放射檢測(即IRMA與RIA)的區(qū)別 
見表13－4。
表13－4 IRMA與RIA的區(qū)別
IRMARIA標記物質抗體抗原標記物用量過量*反應方式直接結合競爭性結合B、F分離方式固相抗原免疫吸附劑第二抗體等（三）標記抗體的制備 特異性抗體的制備，質量要求及125I標記方法與RIA基本相同?？贵wIgG分子中含有多個氨基酸殘基，經(jīng)過碘化反應后，不影響其免疫學活性，并能結合上較多的碘原子，標記物的比放性高，克服了RIA中某些抗原不易標記，或在標記過程中容易發(fā)生化學或放射性損傷等缺點。同時純化的抗體比抗原的純品來源更為豐富。標記抗體的方法比較單一，也易于掌握，不同于標記抗原，每一種抗原必須標記一次，且抗原復雜，多種多樣，標記方法也多種多樣。如果將抗體分子酶解成Fab片段，形成單價抗體，再進行標記，這樣其敏感性將顯著高于一般的IRMA。（四）免疫吸附劑的制備 免疫吸附劑是將高純度的抗原連接在固相載體上而制成。所用固相載體要求對抗原的結合力強，對非特異性蛋白質的吸附性能低，且具有高度的分散性，這樣才能大量地結合特異性抗體。一般采用重氮化的纖維素、溴化氰化的纖維素、瓊脂糖4B珠、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠和玻璃粉等作為抗原吸附劑的固相載體。近年來發(fā)展建立的雙抗體夾心IRMA法，用固相抗體代替抗原免疫吸附劑，反應后形成固相抗體-抗原-標記抗體復合物，經(jīng)過洗滌即可除去游離的剩余標記抗體，簡化了分離步驟，并保證了較高的特異性。固相抗體的制備方法有兩種：一種是物理吸附法，將塑料小珠浸泡在稀釋的抗體中，用前經(jīng)過洗滌即可。或者將抗體吸附在塑料試管中；另一種是采用化學連接法，將抗體較牢固的結合，這樣洗滌時不易脫落，塑料小珠浸泡的條件是50mMol/L pH9.5碳酸鹽緩沖液，抗體的濃度為IgG 0.1μg/ml～100μg/ml。塑料試管吸附抗體的條件是抗體濃度0.1μg/ml～100μg/ml 37℃、4h～6h或4℃ 24h。（四）測定方法根據(jù)試驗設計的特點，可分為以下幾種類型。1．直接IRMA法 將待測抗原與過量的標記抗體進行溫育，使二者結合。然后加入固相抗原免疫吸附劑再次溫育，吸附游離的標記抗體。離心去除沉淀物，測定上清液中放射性強度。根據(jù)標準曲線即可得知待測樣品中的抗原含量。2．雙抗體夾心IRMA法 在待測抗原內(nèi)依次加入固相抗體(或將待測品直接加入抗體包被管內(nèi))和標記抗體，反應后形成固相抗體(Abl)－抗原－標記抗體(Ab2)復合物。洗滌除去未結合的游離標記抗體。測定固相抗體或載體上免疫復合物的放射活性，根據(jù)標準曲線求得待測得抗原量。此法僅適用于檢測有多個抗原決定簇的多肽和蛋白質抗原。3．間接IRMA法 此法是在上述雙抗體夾心法的基礎上，進一步改良為125I標記Ab2的抗體，反應形成的固相抗體(Ab1)－抗原－Ab2－標記抗體(﹡Ab3)的四重免疫復合物。其中標記抗體(﹡Ab3)可做為通用試劑，由于同種Ab2的各種IRMA，省去了標記針對不同抗原的特異性抗體。4．BAS－IRMA法 是將生物素－親和素系統(tǒng)引入免疫放射分析，建立了新一代IRMA。此法的zui大優(yōu)點是使用生物素的抗體和以125I標記親和素為示蹤劑，可以通用于甾體類、甲狀腺素、前列腺素等多種分子物質的檢測。固相半抗原結合物經(jīng)過無水乙醇處理，結合非常牢固，可長期保存；反應和測定在同一試管內(nèi)完成，操作十分簡便，適用于IRMA技術自動化檢測。