染色體CBG標(biāo)本制備實驗

實驗方法原理    
異染色質(zhì)在整個分裂間期及分裂期都是濃縮的，因而其大小較為恒定。它們通常位于著絲粒附近，或在染色體臂上呈現(xiàn)“團塊”，這些染色質(zhì)主要由C顯帶技術(shù)呈現(xiàn)，故稱為C帶。CBG即C帶、Ba（OH）2、Giemsa的簡寫。C帶的根本特征是選擇性地從染色體臂抽取DNA，但在C帶區(qū)有很強抗性，仍保留大部分DNA，Giemsa染色后可見效果良好的C帶。

抽取DNA的過程由三個連續(xù)操作形成。首先，酸處理可使DNA脫嘌呤，但未使DNA骨架斷裂；其次熱堿處理可使DNA變性，促進繼發(fā)的DNA溶解；zui后，熱鹽溶液使DNA骨架斷開并使碎片溶解進入溶液中。因此，zui終以Giemsa染料顯示出DNA的不同分布。在優(yōu)良的C帶標(biāo)本中，常染色質(zhì)只呈現(xiàn)中期染色體的一般外貌，結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)區(qū)著色很深。C帶在檢查1、9、16特別是Y染色體的異質(zhì)區(qū)時尤為重要。
實驗材料    染色體標(biāo)本
試劑、試劑盒    HClBa（OH）2SSCGiemsa染色液
儀器、耗材    恒溫水浴箱染色缸顯微鏡
實驗步驟    
一、用品和試劑
0.2N HCl，5% Ba（OH）2，2×SSC，Giemsa染色液。恒溫水浴箱，染色缸。其余同外周血染色體制備。
 
二、操作步驟 

基本方案
 
1.   酸處理：常規(guī)制作的染色體標(biāo)本（未染色）置0.2 N HCl（室溫）處理15-30分鐘。水洗。
 
2.   堿處理：浸入已預(yù)溫至56℃的5% Ba（OH）2水溶液10分鐘。水洗。
 
3.   熱鹽處理：置2×SSC溶液（67℃）處理60-90分鐘。水洗。
 
4.   染色：l∶10 Giemsa染色液染色10-5分鐘。水洗。氣干。
 
5.   鏡檢。

替代方案：
 
1.   酸處理：常規(guī)制作的染色體標(biāo)本（未染色）置0.2 N HCl（室溫）處理60分鐘。水洗。
 
2.   堿處理：浸入1% Ba（OH）2水溶液（50℃）中15-20秒。水洗。
 
3.   熱鹽處理：置2×SSC溶液（60℃）90分鐘。水洗三次。
 
4.   染色：l∶10 Giemsa染色液染色10分鐘。水洗。氣干。
 
5.   鏡檢。