實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌菌種保存方法介紹

實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌菌種保存方法介紹

    在微生物學(xué)、環(huán)境科學(xué)、分子生物學(xué)、毒理學(xué)、酶學(xué)、疫苗制備、藥品生產(chǎn)等等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)過程中，都需要應(yīng)用各種細(xì)菌，儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)菌種、參考菌種、特殊菌種是*的，下面就幾種實(shí)驗(yàn)室菌株的保存方法簡述如下。 

    1  斜面低溫保存法

    將分純的待存菌接種于適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，得到充分生長后，用封口膜封口，貼上標(biāo)簽，保存于4℃的冰箱中。此法操作簡單、使用方便、不需要特殊設(shè)備，是實(shí)驗(yàn)室菌種保存zui常用的方法。但保存時(shí)間短，一般每個(gè)月都要移種1次，而且菌種容易變異，所以此方法只適合實(shí)驗(yàn)室短期實(shí)驗(yàn)菌株的保存。

    2  半固體瓊脂法

    用接種針將以分純的待存菌，穿刺接種于半固體中，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)后取出，封上無菌的液體石蠟，貼上標(biāo)簽，放4℃冰箱保存。此方法簡便易操作，不需特殊設(shè)備、技術(shù)難度不大，但保存的時(shí)間不長，一般只能保存1年以內(nèi)，而且對(duì)抵抗力弱以及一些特殊菌種大概只能存活3～6個(gè)月，需要頻繁的傳代，這樣很容易使菌株受到污染、變異。所以此方法不適用菌種的長期保存，只適合實(shí)驗(yàn)室一些要求不高的菌種的短期保存。

    3  液體石蠟保存法

    將液體石蠟滅菌，放于37℃恒溫箱中，使水汽蒸發(fā)掉備用。再將已分純的待存菌在zui適宜的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得到健壯的菌體，用無菌吸管吸取已滅菌的液體石蠟，注入已長好的斜面培養(yǎng)基上，用量以高出斜面1cm為準(zhǔn)，將試管直立，貼上標(biāo)簽，置4℃下保存。此法制作簡單，不需要特殊設(shè)備，菌種可以保存1年左右不需要經(jīng)常移種，缺點(diǎn)是保存的時(shí)候需要直立放置。此方法適合實(shí)驗(yàn)室短期菌株的保存，而且保存時(shí)需要一定的空間［1］。

    4  高層半固體瓊脂石蠟保存法

    將待存菌經(jīng)平板劃線分離后，挑單個(gè)菌落用接種針反復(fù)穿刺接種到高層半固體瓊脂培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)箱培養(yǎng)后取出，用滅菌過的液體石蠟滴加到半固體瓊脂菌種管表層約0.5cm高度，貼上標(biāo)簽，存放4℃冰箱。此法操作簡便，不需要特殊設(shè)備，效果好，可以保存菌株1～2年。所以適合實(shí)驗(yàn)室菌株的較長期的保存［2］。

    5  紙片法

    將已分純的待存菌用無菌鑷子鑷取紙片，在紙片上刮取4～5個(gè)菌落，放入凍存管內(nèi)，蓋上蓋子后用封口膠布封住邊緣，貼上標(biāo)簽，放入冰箱冷凍保存（－20℃左右）。此方法具有操作簡單、不需特殊設(shè)備、經(jīng)濟(jì)實(shí)用、保存空間小等，而且保存時(shí)間至少2年，但對(duì)一些營養(yǎng)要求比較高的菌種，存活率不理想。所以此方法適合實(shí)驗(yàn)室一些營養(yǎng)要求不高的菌種較長時(shí)間的保存［3］。

    6  甘油液保存法

    將已分純的待存菌接種于肉湯中，37℃培養(yǎng)18～24h，然后按5份肉湯溶液、2份甘油－生理鹽水保存液的比例分裝于滅菌的微量離心管或細(xì)胞凍存管中，貼上標(biāo)簽，置－80℃～－20℃冰箱保存。此法操作簡便，不需要特殊設(shè)備，效果好，可以保存菌種3年左右，無變異現(xiàn)象，而且此方法還可以保存一些要求較高的特殊菌種，適用范圍廣。所以此方法適合實(shí)驗(yàn)室普通菌種或特殊菌種的較長期的保存［4］。

    7  濕牛奶凍存法

    將待存菌種于各自生長良好的平板培養(yǎng)基上，經(jīng)分純后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。用準(zhǔn)備好的保護(hù)劑牛奶洗下菌苔，再用無菌毛細(xì)滴管吸取菌懸液滴入菌種管球部，每管球部約有一半的菌液，之后火焰封口，貼上標(biāo)簽，保存于－20℃冰箱。此方法操作比較簡便，不需特殊設(shè)備、不需要花費(fèi)很多時(shí)間，而且保存時(shí)間大約3年，時(shí)間較長，不易變性，也不容易污染。所以此方法適合實(shí)驗(yàn)室菌種較長時(shí)間的保存［3］。

    8  蒸餾水保存法

    取滅菌蒸餾水6～7ml加于已接待存菌斜面培養(yǎng)基的試管內(nèi)，用吸管研磨，洗下斜面上的菌苔，充分混勻，將此菌液分裝于滅菌的螺旋小瓶中，或用膠塞密封，貼上標(biāo)簽，置于4℃保存。此法制作簡單，不需要特殊設(shè)備，且不需要經(jīng)常移種，而且可以保存數(shù)年，但要注意保存的時(shí)候需要直立放置。所以此方法適合實(shí)驗(yàn)室菌種的長期保存［4］。

    9  冷凍真空干燥法

    將待存菌分純后，用準(zhǔn)備好的保護(hù)劑牛奶洗下菌苔，把菌懸液滴入菌種管后，在管口抽取少許棉花塞入管內(nèi)*處，放入冰箱－40℃速凍40min，放入準(zhǔn)備好的混有鹽的冰中，接上真空泵，真空抽干呈粉末狀，火焰封口，貼上標(biāo)簽，保存于－40℃冰箱。此法保存時(shí)間長，可達(dá)15年，不易變性，但需要儀器，一般實(shí)驗(yàn)室難以配備，而且過程復(fù)雜，操作難度大，需要較長時(shí)間才能完成。所以此方法適合具有條件的實(shí)驗(yàn)室菌種的長期保存［3］。

    10  小結(jié)

    綜上所述，我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)過程中或者短期保存菌種時(shí)，可以選擇斜面低溫保存法、半固體瓊脂法、液體石蠟保存法、高層半固體瓊脂石蠟保存法、紙片法，進(jìn)行保存；如果需要較長時(shí)間的保存菌株，可以選擇甘油液保存法、濕牛奶凍存法、蒸餾水保存法、冷凍真空干燥法保存菌株，其中冷凍真空干燥法需要實(shí)驗(yàn)室配備好相應(yīng)的儀器設(shè)備。如果一些菌株?duì)I養(yǎng)要求比較高的話，可以選擇甘油液保存法、冷凍真空干燥法保存。當(dāng)然上述菌株保存的方法不是、zui方便的保存法，還需要我們不斷的探索，不斷的研究，找到一種或幾種簡單、方便、時(shí)間長的保存方法。