蛋白酶K基因突變的技術(shù)解讀

　蛋白酶K的妙用，使用它的目的，下面都會介紹一些技術(shù)，希望能夠幫助大家。

　　*、蛋白酶K的使用妙招

　　蛋白酶 K 的妙用，坦率地說，蛋白酶 K 的這個用途，不是因為該發(fā)現(xiàn)有什么創(chuàng)新，而是因為它的實用性。當別人還在討論 DEPC 有什么毒性，就在使用蛋白酶 K 替代 DEPC 實現(xiàn)滅活 RNase A 的目的了。

　　與保存及酶反應有關的水，除了酶的殘留是一個考慮因素外，水的純度也是我考慮的;這種用途的水，我使用的是 Sigma 進口的無酶的 Millipore 水。

　　第二、蛋白酶K基因突變的技術(shù)解讀

　　蛋白酶K來源于林伯氏白色念球菌的蛋白酶K基因，我公司采用基因突變技術(shù)，對基因進行定點突變后，將其重組到酵母染色體上，利用發(fā)酵技術(shù)，通過誘導獲得高活性的重組蛋白酶K，通過基因改造后，提高大大提高了酶的活性。

　　蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶，在pH 4到pH 12的條件下均有活性，在SDS、尿素或EDTA存在時亦很穩(wěn)定。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的降解。此酶經(jīng)脫色和色譜純化去除了RNA和DNA，也檢測不到其它雜酶活性。

　　由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定，還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因而它應用很廣泛，主要用在基因診斷試劑盒、基因組DNA提取試劑盒、RNA提取試劑盒中去除DNA和RNA制備中的核酸酶，也可以于提取組織中非蛋白成份降解含有蛋白質(zhì)的雜質(zhì)。譬如DNA疫苗和肝素的制備等。