牛β乳球蛋白（β-Lg）ELISA試劑盒

牛β乳球蛋白(β-Lg)ELISA試劑盒　　

尊敬的客戶，感謝你選用本公司的產(chǎn)品。本產(chǎn)品適用于體外定量檢測(cè)牛血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織等中天然和重組的β-Lg濃度。檢測(cè)其他特殊樣本請(qǐng)咨詢本公司。試劑盒僅供科研使用。 使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)并檢查試劑盒組分。 如有疑問(wèn)，請(qǐng)武漢新啟迪生物科技有限公司。 您將得到我們的服務(wù)。

本試劑盒采用雙抗體夾心法，雙抗體夾心原理，是基于要測(cè)試的抗原具有二價(jià)以上的特性，能識(shí)別包被抗體，同時(shí)能識(shí)別檢測(cè)抗體，具體過(guò)程如下：

1. 將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)，并用無(wú)關(guān)蛋白封閉空余結(jié)合位點(diǎn)。
2. 加受檢標(biāo)本使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
3. 加生物素標(biāo)記抗體，使固相免疫復(fù)合物上的抗原與生物素標(biāo)記抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的生物素標(biāo)記抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
4. 加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素，使生物素標(biāo)記抗體與辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)記物。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
5. 加入底物顯色，即可計(jì)算標(biāo)本濃度。
6. 注：一個(gè)抗體分子上可以標(biāo)記上若干個(gè)生物素分子，一個(gè)生物素分子可以結(jié)合一個(gè)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素，從而帶來(lái)了大量的辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合到抗體上，比傳統(tǒng)的直接辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體具有更高的敏感性和放大效應(yīng)。

【牛β-Lg酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)原理】

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的抗體為抗牛β-Lg單克隆抗體。檢測(cè)相抗體為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過(guò)PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。

【牛β-Lg酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)原理示意圖】

 *步            第二部

第三步            第四步

【試劑盒組成】

名稱                             96 Tests            48 Tests                     保存條件

1．牛β-Lg抗體包被板條                  8×12                  8×6                            4/-20℃

2．牛β-Lg標(biāo)準(zhǔn)品                             2 支（凍干）     1 支（凍干）            4/-20℃

3．濃縮生物素化牛β-Lg抗體           1支                     1 支                          4/-20℃

4．濃縮酶結(jié)合物(ABC)                     1支                     1 支                        4/-20℃

5. 酶結(jié)合物(ABC)稀釋液           1瓶             1瓶               4/-20℃

6．抗體稀釋液                    1瓶                     1 瓶                          4/-20℃

7．標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液                  1瓶                     1 瓶                          4/-20℃

8．樣品稀釋液　                  1瓶                     1 瓶                          4/-20℃

9．濃縮洗滌液                                  1 瓶（25×）       1 瓶（25×）              4/-20℃

10．顯色劑A                                   1 瓶                   1 瓶 (避光)               4/-20℃

11．顯色劑B                                   1 瓶            1 瓶                    4/-20℃

12．終止液                                      1 瓶            1 瓶                          4/-20℃

13．說(shuō)明書(shū)                                     1 份            1 份                          室溫

【試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)設(shè)備和器材】

1. 酶標(biāo)儀(450nm檢測(cè)波長(zhǎng)濾光片，570nm或630nm校正波長(zhǎng)濾光片) 。
2. 洗板機(jī)（可調(diào)注液量，保證每孔350μl洗液而不溢出）。
3. 超凈工作臺(tái)，生物安全柜，通風(fēng)柜。
4. 高精度單道加液器（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
5. 高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).
6. 37℃恒溫箱。
7. 低溫離心機(jī)。
8. 電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.
9. 分析天平。
10. 剪刀，鑷子，鉗子等。
11. 漩渦混合儀，低頻振蕩器等。

【試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)耗材及試劑】

1. 離心管（容量為1.5ml，5ml等）。
2. 一次性吸頭（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl）.
3. 純凈水或蒸餾水。
4. 坐標(biāo)紙。
5. 吸水紙。
6. EDTA，枸櫞酸鈉，肝素

【標(biāo)本收集注意事項(xiàng)】

1. 收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原，無(wú)內(nèi)毒素試管。
2. 血清和血漿避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。
3. 標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
4. 標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測(cè)，需按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融。 
5. 可根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)) 。
6. 收集標(biāo)本，盡量做到雙份的用量，避免一次實(shí)驗(yàn)失敗，重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)標(biāo)本缺失，從而耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
7. 收集標(biāo)本時(shí)，應(yīng)該做好防護(hù)措施（比如戴手套，口罩，護(hù)目鏡等），認(rèn)為所有標(biāo)本都具有一定的潛在危險(xiǎn)性。
8. 樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面，并且正確使用生物安全柜。