離心機離技術(shù)是根據(jù)顆粒在一個實用離心場合中的狀態(tài)而發(fā)展起來的新技術(shù)。不同密度、大小或形狀的顆粒在不同速度的離心場合中沉降,所以一個大體是球形非均一的混合物,可以用離心的方法加以分離,離心機是為了進一步研究生物化學、分離的物質(zhì)。例如收集細胞、分離血漿,從這些預(yù)純化的制劑中分離DNA和蛋白質(zhì)分子,并可分離出病毒以及大規(guī)模大腸桿菌、嚴細胞成分、核蛋白微粒等。
電動離心機有一個繞本身軸線高速旋轉(zhuǎn)的圓筒,稱為轉(zhuǎn)鼓,通常由電動機驅(qū)動。懸浮液(或乳濁液)加入轉(zhuǎn)鼓后,被迅速帶動與轉(zhuǎn)鼓同速旋轉(zhuǎn),在離心力作用下各組分分離,并分別排出。通常,轉(zhuǎn)鼓轉(zhuǎn)速越高,分離效果也越好。
電動離心機采用旋轉(zhuǎn)離心力使溶液中物質(zhì)分層分離。該儀器采用無級調(diào)速和自動調(diào)節(jié)平衡裝置,具有運轉(zhuǎn)平穩(wěn)、體積小、造型美觀、溫升低、使用效率高以及適用性廣等優(yōu)點。特制鋁合金離心轉(zhuǎn)盤,確保離心管不易損壞。該儀器廣泛用于醫(yī)院、化學以及生物化學實驗室對血清、血漿、免疫等作定性分析實驗。
電動離心機在生物科學上的應(yīng)用已經(jīng)不在是大驚小怪的事了,離心技術(shù)在生物科學,特別是在生物化學和分子生物學研究領(lǐng)域,早已起到重要的作用,每個生物化學和分子生物學實驗室以及各類高校都要安裝多種型式的高速離心機。離心技術(shù)主要用于各種生物樣品的分離和制備,生物樣品懸浮液在高速旋轉(zhuǎn)下,由于巨大的離心力作用,使懸浮的微小顆粒(細胞器、生物大分子的沉淀等)以一定的速度沉降,從而與溶液得以分離,而沉降速度取決于顆粒的質(zhì)量、大小和密度。
一般情況下,低速離心時常以轉(zhuǎn)速“rpm”來表示,高速離心時則以“g”表示。計算顆粒的相對離心力時,應(yīng)注意離心管與旋轉(zhuǎn)軸中心的距離“r”不同,即沉降顆粒在離心管中所處位置不同,則所受離心力也不同。因此在報告超離心條件時,通常總是用地心引力的倍數(shù)“×g”代替每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)“rpm”,因為它可以真實地反映顆粒在離心管內(nèi)不同位置的離心力及其動態(tài)變化??萍嘉墨I中離心力的數(shù)據(jù)通常是指其平均值(RCFav),即離心管中點的離心力。
為便于進行轉(zhuǎn)速和相對離心力之間的換算,Dole和Cotzias利用RCF的計算公式,制作了轉(zhuǎn)速“rpm”、相對離心力“RCF”和旋轉(zhuǎn)半徑“r”三者關(guān)系的列線圖,圖式法比公式計算法方便(列線圖參見附錄)。換算時,先在r標尺上取已知的半徑和在rpm標尺上取已知的離心機轉(zhuǎn)數(shù),然后將這兩點間劃一條直線,與圖中RCF標尺上的交叉點即為相應(yīng)的相對離心力數(shù)值。注意,若已知的轉(zhuǎn)數(shù)值處于rpm標尺的右邊,則應(yīng)讀取RCF標尺右邊的數(shù)值,轉(zhuǎn)數(shù)值處于rpm標尺左邊,則應(yīng)讀取RCF標尺左邊的數(shù)值。
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