透析袋如何使用

　　透析已成為生物化學實驗室zui簡便zui常用的分離純化技術之一。在生物大分子的制備過程中，除鹽、除少量有機溶劑、除去生物小分子雜質和濃縮樣品等都要用到透析的技術。透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內，而鹽和小分子物質不斷擴散透析到袋外，直到袋內外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內未透析出的樣品溶液稱為“保留液”，袋（膜）外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。透析的動力是擴散壓，擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶質在膜內外兩邊的濃度梯度，還正比于膜的面積和溫度，通常是4℃透析，升高溫度可加快透析速度。透析膜可用動物膜和玻璃紙等，但用的zui多的還是用纖維素（再生纖維素RC、纖維素酯CE、PVDF等）制成的透析膜，目前常用的是美國美國光譜醫(yī)學公司（spectrumlabs）和美國UnionCarbide（聯(lián)合碳化物公司）生產的各種尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋內的生物大分子的zui小分子量，縮寫為MwCO）大概有100-500、500-1000，1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等種類，單位為道爾頓（D）。商品透析袋制成管狀，其扁平寬度為8mm～77mm不等。為防干裂，出廠時都用10％的甘油處理過，并含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質，它們對蛋白質和其它生物活性物質有害，用前必須除去。1.將透析管剪成適當長度（10-20cm）的小段，即成透析袋。2.在大體積的2%（m/v)碳酸氫鈉和1mmol/LEDTA(PH=8)中將透析袋煮沸10min。3.將透析袋用蒸餾水*漂洗。4.將透析袋置1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min。5.透析袋冷卻后存放于4度，應確保透析袋始終浸沒在液體中。注：從此步起用透析袋時一定要戴手套操作。6.在使用之前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗。注：也可以將透析袋放在廣口瓶中充滿水，松動瓶蓋，于20psi（1.40kg/cm2)高壓滅菌10min，代替第四步用1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min的操作。新透析袋如不作如上的特殊處理，則可用沸水煮五至十分鐘，再用蒸餾水洗凈，即可使用。美國光譜醫(yī)學公司生產的透析袋大部分是預處理過的，即用型，使用前只需用蒸餾水沖洗即可使用，spectra/por7系列和生物技術級的透析袋基本不含硫化物和重金屬離子。使用時，一端用橡皮筋或線繩扎緊，也可以使用特制的透析袋夾夾緊，由另一端灌滿水，用手指稍加壓，檢查不漏，方可裝入待透析液，通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，透析的小分子量較大時，袋外的水和緩沖液過量進入袋內將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質溶液透析過ye時，體積增加50％是正常的。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些，可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析，可在袋內放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。檢查透析效果的方法是：用1％BaCl2檢查(NH4)2SO4，用1％AgNO3檢查NaCl、KCl等。為了提高透析效率，還可以使用各種透析裝置。使用者也可以自行設計與制作各種簡易的透析裝置。美國美國光譜醫(yī)學公司生產的各種型號的透析設備，由于使用對流透析的原理，使透析速度和效率大大提高。