人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒使用說明書

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　　人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒使用說明書通常包括試劑盒的用途、實驗原理、試劑盒組成、樣本處理及要求、操作步驟、注意事項以及試劑盒性能等內容。以下是一份基于多個來源整合的IGF-1 ELISA試劑盒使用說明書概要：

　　一、試劑盒用途

　　本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中人胰島素樣生長因子1(IGF-1)的含量。

　　二、實驗原理

　　試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人胰島素樣生長因子1(IGF-1)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人胰島素樣生長因子1(IGF-1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。

　　三、試劑盒組成

　　試劑盒通常包含以下組件(具體數量可能因不同廠家或批次而異)：

　　酶標包被板

　　標準品

　　標準品稀釋液

　　酶標試劑

　　樣品稀釋液

　　顯色劑A液和B液

　　終止液

　　濃縮洗滌液

　　封板膜

　　密封袋

　　說明書

　　四、樣本處理及要求

　　?血清?：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　?血漿?：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　?組織勻漿?：用預冷的PBS(0.01M，pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。

　　?細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本?：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　五、操作步驟

　　?標準品的稀釋與加樣?：在酶標包被板上設標準品孔，加入不同濃度的標準品。

　　?加樣?：分別設空白孔、待測樣品孔，加入待測樣品。

　　?溫育?：用封板膜封板后置37℃溫育一定時間。

　　?洗滌?：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置后棄去，重復多次，拍干。

　　?加酶?：每孔加入酶標試劑(空白孔除外)。

　　?溫育?：同前。

　　?洗滌?：同前。

　　?顯色?：每孔加入顯色劑A和B，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色一定時間。

　　?終止?：每孔加終止液，終止反應。

　　?測定?：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。

　　六、注意事項

　　試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。

　　濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。

　　請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。

　　封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　底物請避光保存。

　　嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

　　所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

　　七、試劑盒性能

　　?檢測范圍?：根據不同廠家和批次，檢測范圍可能有所不同，如5ng/mL~160ng/mL。

　　?靈敏度?：低檢測濃度小于一定值，如1.0ng/mL。

　　?特異性?：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

　　?重復性?：板內變異系數和板間變異系數均小于一定值，如板內變異系數小于10%，板間變異系數小于15%。

　　請注意，以上內容僅為一般性說明，具體使用時應嚴格遵循所購試劑盒附帶的使用說明書進行操作。