synvolux無血清轉(zhuǎn)染方案

本方案提供了使用SAINT sRNA（目錄號：SR-2003-01、SR-2003-02、SR-2003-04）。

無血清轉(zhuǎn)染方案：

1.準(zhǔn)備細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

粘附細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞置于0.5ml生長培養(yǎng)基血清中，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時融合50-80%。

懸浮細(xì)胞：在制備復(fù)合物之前，將0.5-1.5x106個細(xì)胞懸浮在0.5ml無血清生長培養(yǎng)基中。

2.讓SAINT sRNA小瓶達(dá)到室溫。

3.將SAINT sRNA充分渦旋約30秒。

4.使用1:40的siRNA（µg）與SAINT sRNA（µl）比率制備復(fù)合物。

5.對于每個轉(zhuǎn)染樣品，按如下步驟制備復(fù)合物：

a.在50µl PBS中稀釋0.125μg siRNA。

b.將5µl SAINT sRNA加入siRNA/PBS溶液中，輕輕重新懸浮。

7.在室溫下將混合物孵育5-10分鐘（溶液可能看起來渾濁）。

8.向細(xì)胞中添加復(fù)合物：

粘附細(xì)胞：從細(xì)胞中吸取生長培養(yǎng)基，并將復(fù)合物填充至0.5ml使用無血清生長培養(yǎng)基。向細(xì)胞中加入去復(fù)合物（0.5ml）。

懸浮池：將制備的復(fù)合物逐滴加入孔中。

9.在37°C的CO2孵化器中孵育細(xì)胞2-3小時。

10.在基因敲除測試前1-3天。 向孔中加入1ml含血清的生長培養(yǎng)基，并在37°C的CO2孵化器中孵育細(xì)胞，