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大鼠苗條素受體(LROb-R)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書

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    2025年07月09日
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一次性吸頭,血清,微孔酶標(biāo)板?,標(biāo)準(zhǔn)品,LR/Ob-R抗體
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本生(天津)健康科技有限公司
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資料簡(jiǎn)介

  大鼠苗條素受體(LROb-R)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書

  BS-2971 大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒

  一、試劑盒簡(jiǎn)介

  大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒是一種基于雙抗體夾心法原理設(shè)計(jì)的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒,用于定量測(cè)定大鼠血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及相關(guān)液體樣本中苗條素受體的含量?。該試劑盒通過(guò)特異性抗體捕獲目標(biāo)抗原,再與酶標(biāo)記抗體結(jié)合形成復(fù)合物,最終通過(guò)顯色反應(yīng)進(jìn)行定量分析?。

  二、實(shí)驗(yàn)原理

  本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法:

  將純化的大鼠苗條素受體抗體包被于微孔板,形成固相抗體

  加入樣本或標(biāo)準(zhǔn)品,其中的LR/Ob-R與固相抗體結(jié)合

  加入HRP標(biāo)記的LR/Ob-R抗體,形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物

  洗滌后加入TMB底物顯色,在HRP酶催化下產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,酸作用下轉(zhuǎn)為黃色

  顏色的深淺與樣品中LR/Ob-R濃度呈正相關(guān),450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值?

  三、試劑盒組成

  試劑盒通常包含以下組分(48T/96T兩種規(guī)格):

  微孔酶標(biāo)板?:8孔×6條(48T)或8孔×12條(96T),預(yù)包被抗體?

  標(biāo)準(zhǔn)品?:濃度通常為2700ng/L或72ng/L(不同批次可能有差異),0.3mL-0.5mL×6管?

  檢測(cè)抗體-HRP?:5mL(48T)/10mL(96T)?

  樣本稀釋液?:3mL(48T)/6mL(96T)?

  20×洗滌緩沖液?:15mL(48T)/25mL(96T),使用前需稀釋?

  顯色劑?:A液和B液各3mL(48T)/6mL(96T)?

  終止液?:3mL(48T)/6mL(96T)?

  封板膜?:2張?

  說(shuō)明書?:1份?

  四、樣本采集與處理

  1. 樣本類型

  適用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、尿液、胸腹水、腦脊液等?

  2. 樣本處理方法

  血清?:全血室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后,1000g離心20分鐘取上清?

  血漿?:EDTA或肝素抗凝,采集后30分鐘內(nèi)2-8℃ 1000g離心20分鐘?

  細(xì)胞培養(yǎng)上清?:1000g離心20分鐘取上清?

  組織勻漿?:用PBS(pH7.2-7.4)制備10%勻漿,10000g離心5分鐘取上清?

  3. 樣本保存

  短期(48小時(shí)內(nèi))可2-8℃保存

  長(zhǎng)期應(yīng)分裝后-20℃保存,避免反復(fù)凍融?

  溶血樣本不宜檢測(cè)?

  五、實(shí)驗(yàn)步驟

  試劑準(zhǔn)備?:

  從冰箱取出試劑盒,室溫平衡30分鐘?

  配制洗滌液:將20mL濃洗滌液加蒸餾水稀釋至600mL(30倍)?

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋:按說(shuō)明書梯度稀釋(通常設(shè)5-7個(gè)濃度點(diǎn))?

  加樣?:

  設(shè)空白孔(僅加樣本稀釋液)、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔

  分別加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣本?

  孵育?:

  37℃孵育90分鐘?

  棄去液體,拍干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)5次?

  加酶標(biāo)試劑?:

  每孔加入100μL HRP標(biāo)記抗體(空白孔加稀釋液)

  37℃孵育60分鐘?

  同上洗滌5次?

  顯色?:

  每孔加入50μL顯色劑A,再加50μL顯色劑B

  37℃避光顯色15-30分鐘?

  終止與測(cè)定?:

  每孔加入50μL終止液

  15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值?

  六、結(jié)果計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?

  根據(jù)樣本OD值,從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)濃度?

  若樣本稀釋過(guò),需乘以稀釋倍數(shù)?

  也可用回歸方程計(jì)算:將OD值代入方程Y=aX+b,求出X值?

  七、注意事項(xiàng)

  試劑保存?:

  未開(kāi)封試劑盒2-8℃保存,有效期內(nèi)使用?

  開(kāi)封后未用完板條應(yīng)立即密封,加干燥劑保存?

  操作規(guī)范?:

  不同批次試劑不可混用?

  使用一次性吸頭避免交叉污染?

  避免顯色劑接觸金屬器械?

  洗滌要充分,拍干時(shí)避免吸水紙直接接觸孔內(nèi)?

  質(zhì)量控制?:

  建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本做雙復(fù)孔?

  顯色過(guò)淺可適當(dāng)延長(zhǎng)溫育時(shí)間?

  若OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍,應(yīng)調(diào)整樣本稀釋比例重新測(cè)定?

  儀器要求?:

  使用精確的移液器(0.5-10μL, 20-200μL, 200-1000μL)?

  酶標(biāo)儀需提前預(yù)熱并校準(zhǔn)?

  八、技術(shù)參數(shù)

  檢測(cè)范圍?:通常為15-1000ng/L(不同品牌可能有差異)?

  靈敏度?:通常5[6

  精密度?:

  板內(nèi)變異系數(shù)<10%

  注:以上資料僅供參考,不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù),具體產(chǎn)品說(shuō)明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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