貂肺上皮細胞相關(guān)信息，Mv.1.Lu（NBL-7）細胞

貂肺上皮細胞相關(guān)信息，Mv.1.Lu（NBL-7）細胞

       1.玻璃吸管和玻璃培養(yǎng)瓶的消毒:1）高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2）干烤消毒140度2小時以上;
       2.無菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈,紫外線照射40分鐘以上;各種培養(yǎng)板照射3小時以上;
       3.培養(yǎng)基（pH7.2）和血清配制好后要做無菌試驗:將血清按10%加入培養(yǎng)基內(nèi),用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培養(yǎng)基5-10ml置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天,肉眼見無渾濁或沉淀等異物.分裝后置-20度保存;
       4.消化液（pH7.8）或其它加入液,應用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌,分裝成支置-20度保存;
       5.各種炒嫻囊禾甯次率庇Ρ咭”呷諢?否則有的液體（特別是培養(yǎng)基）容易產(chǎn)生沉淀.
       6.培養(yǎng)箱應先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍（如有紫外線的應照射1小時以上,如有高溫滅菌的應按程序來菌）.至少每月一次.
       7.進入操作時應注意先清洗雙手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作時注意無菌臺內(nèi)空間層次.手及物品不要在暴露的瓶口上方來往,如果數(shù)量較多,培養(yǎng)瓶應放在與酒精燈平行地方便于操作,瓶與瓶之間應相隔一定的距離,開瓶（蓋）時應先用75%酒精反復擦拭或用燈燒,開開后應用燈先燒口,然后燒蓋.用完后同樣操作.整個操作過程盡量在無菌臺靠里面一點.
        復蘇:
       1.應遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調(diào)至37-37.5度,取出凍存的細胞迅速放入后交細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化.
       2.在無菌臺內(nèi)將*培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶內(nèi),約5ml左右,然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細胞,置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃,使細胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng).
        傳代:
       1.貼壁細胞:
          對于貼壁細胞應先吸（倒）盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱.50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進行消化,（根據(jù)配制強度經(jīng)驗）,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?/span>.
        2.懸浮細胞:

一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心500rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng).

培養(yǎng)細胞的*培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如MEM）和添加劑（如血清或無血清培養(yǎng)用的某些確定的激素及生長因子）組成，培養(yǎng)基的配方一直在改進，其中包括抗生素和抗有絲分裂劑等等。