AN11L217、AN11L218-一站式鼠尾基因快速鑒定試劑盒
2025-01-17
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產品描述
一站式鼠尾基因型快速鑒定試劑盒適用于從鼠尾、鼠耳、腳趾或其它組織快速提取基因組DNA，并進行PCR擴增，從而實現(xiàn)快速、便捷且準確的小鼠基因型鑒定(genotyping)及基因組的相關分析。
本試劑盒可在10-15 min內快速消化和提取鼠尾組織樣品的基因組DNA，有效簡化了鼠尾基因組DNA獲取過程。本試劑盒還提供了預配制的2X PCR Master Mix (Green)，內含Taq DNA Polymerase，PCR Buffer，dNTP和上樣緩沖液，只需加入適量引物、模板和水即可進行PCR擴增。PCR結束后，產物可直接進行電泳分析，方便快捷。
推薦組織用量
3~5mm2 小鼠尾尖 (2~3mm)
5~10mm2小鼠耳朵 (3~5mm)
1個小鼠腳趾
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
一站式鼠尾基因快速鑒定試劑盒（Direct Mouse Genotyping Kit） | AN11L217 | 200 T |
一站式鼠尾基因快速鑒定試劑盒（Direct Mouse Genotyping Kit） | AN11L218 | 500 T |
產品組分
組分 | AN11L217 | AN11L218 | 保存條件 |
A. DNA extraction solution | 15 mL | 40 mL | 室溫 |
B. Stop solution | 15 mL | 40 mL | 室溫 |
C. 2X PCR Master Mix | 3*1 mL | 8*1 mL | -20℃ |
運輸與保存
藍冰運輸。組分按照保存條件保存，有效期12個月。
使用方法
1. 基因組提取步驟：
(1) 向每個樣本中加入70 μL DNA extraction solution，確保組織浸沒在溶液中。
(2) 在95℃的金屬浴或水浴中裂解處理10-15 min。裂解完成后，組織在外觀上仍然保持完整，但足量的基因組DNA已成功釋放，不影響后續(xù)的PCR實驗。
(3) 裂解后，短暫離心去除管蓋內壁的液滴，然后在室溫下靜置2 min。隨后加入70 μL終止液（Stop solution），輕輕混勻，終止裂解反應。
(4) 12000 rpm離心2 min，取上清液作為PCR模板。上清液在消化后可在4℃保存一個月，或在-20℃下保存一年。
2. PCR擴增步驟：
(1) 將2X PCR Master Mix（Green）置于冰浴或冰盒內，并準備PCR反應所需的引物、模板和水。
(2) 參考表1，在冰浴上配制PCR反應體系。
(3) 使用移液器輕輕吹打或輕微漩渦混合（Vortex）以確保充分混勻。隨后，在室溫下短暫離心幾秒鐘，使液體集中于管底。
(4) 將配制好的PCR反應體系放置在PCR儀中，啟動PCR反應。
(5) 可參考表2設置PCR反應程序參數。PCR反應結束后，可直接進行瓊脂糖凝膠電泳。
表1：PCR反應體系
成分 | 用量 |
Template | 2 μL |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 μL |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 μL |
2x PCR Master Mix | 10 μL |
ddH2O | 7 μL |
Total | 20 μL |
表2：PCR反應程序設定
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
預變性 | 94 ℃ | 2 min | 1 |
變性 | 94 ℃ | 30s | 30~35 |
退火 | 55 ℃ | 30s | |
延伸 | 72 ℃ | 30s (1kb/min) | |
終延伸 | 72 ℃ | 10 min | 1 |
臨時保存 | 4 ℃ | forever | ─ |
注意事項
1. 本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。
2. PCR產物少或沒有條帶。引物設計不佳是最常見的問題，需合理優(yōu)化引物；在室溫下配置反應體系易引發(fā)非特異性擴增，建議在冰浴中進行；退火溫度不當可能影響結果，建議使用溫度梯度PCR儀優(yōu)化，或通過多次PCR反應找到最佳溫度；延伸時間不足。建議每1 kb片段延伸1 min，難以擴增的片段可延長至1.5-2 min。
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