10mg/2ml 鼠尾膠原蛋白
參考價(jià) | ¥ 480 |
訂貨量 | ≥1 |
- 公司名稱 北京索萊寶科技有限公司
- 品牌 SOLARBIO/索萊寶
- 型號 10mg/2ml
- 產(chǎn)地 北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷景盛南四街15號85A三層
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2016/8/8 18:50:46
- 訪問次數(shù) 1065
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索萊寶鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠,模擬真實(shí)的生長環(huán)境,使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長。本產(chǎn)品規(guī)格為 10mg, (5mg/ml), 溶解于 0.006mol/L HAc, 無菌。
使用方法
1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被 *濃度: 1-5ug/cm2
以包被濃度為 2 ug/cm2 為例:
用無菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。按表 (一)體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中:
| 表面積(cm2 ,每孔或每皿) | 加入 0.012mg/ml 膠原的體積 ( ul ) |
96孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 0.3 | 50 |
24孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 1.9 | 300 |
12孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 3.8 | 600 |
6孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 9.5 | 1580 |
35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 | 8 | 1330 |
60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 | 21 | 3500 |
100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 | 55 | 9170 |
確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,開蓋在超凈臺上晾干。 也可以在室溫放置 1小時(shí)后,用PBS洗3-4次后直接使用。
包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個(gè)月以上的時(shí)間。
2、三維膠原的制備
生友鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。生友膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。
需要的溶液 ( 均需要 無菌 、 預(yù)冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水
A.不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul生友I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管 中,加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測試)。將培養(yǎng) 器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10xPBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。
B.含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,并放置于冰浴中。將200ul生友 I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮 液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注:I型在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫。
北京索萊寶科技有限公司 專業(yè)生化試劑生產(chǎn)商
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