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熒光定量PCR檢測

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熒光定量PCR熒光定量PCR技術(shù)

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上?;偕锟萍加邢薰境闪⒂?013年6月,位于上海周浦時代醫(yī)創(chuàng)園,是一家銳意進取的生物高科技創(chuàng)新型企業(yè),集生物技術(shù)研發(fā)、支持和服務(wù)為一體,為生命科學(xué)領(lǐng)域的科研人員,臨床醫(yī)學(xué)人員等提供TA克隆,亞克隆,質(zhì)粒構(gòu)建,RNAi干擾,miRNA定量,熒光定量PCR,SNP分型,STR檢測,基因編輯,基因敲除,動物造模等相關(guān)的技術(shù)服務(wù)的同時,我們也在不斷摸索,積極研發(fā)自己的試劑產(chǎn)品,如分子,蛋白,細胞等方面的常規(guī)試劑,提供給我們的敬愛的科研工作者,并且我們與國內(nèi)外具有競爭力的耗材儀器廠家達成協(xié)議,保持長期穩(wěn)定的合作,秉承在技術(shù)方面提供支持的同時,也同樣提供國內(nèi)外優(yōu)質(zhì)的試劑,耗材,常規(guī)儀器、分析儀器,滿足客戶的不同需求,一站式的服務(wù)是我們經(jīng)營的理念,我們將不斷提高技術(shù)人員的技術(shù)水平,銷售人員的業(yè)務(wù)能力,圓滿完成技術(shù)服務(wù)項目及產(chǎn)品銷售,同時,并為廣大的科研工作者提供可靠的產(chǎn)品和全面的技術(shù)服務(wù),用我們過硬的技術(shù),優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品,完善的服務(wù)獲得每個客戶信任,支持和厚愛,最后感謝各位的支持和幫助。
公司技術(shù)平臺特色:
分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)項目包括
TA克隆,亞克隆;質(zhì)粒構(gòu)建,熒光定量PCR檢測;RNAi干擾;miRNA檢測;SNP分型;STR檢測等;文庫構(gòu)建;高通量測序。

蛋白組學(xué)技術(shù)服務(wù)項目包括:
蛋白抽提,蛋白純化,WB,Elisa,免疫組化,質(zhì)譜鑒定,N端測序等。

細胞生物學(xué)技術(shù)服務(wù)項目包括:
細胞培養(yǎng),細胞轉(zhuǎn)染;慢病毒包裝;腺病毒包裝; 基因編輯;基因敲除;動物造模等;

代理銷售產(chǎn)品:

儀器類:移液器:Eppendorf移液器、吉爾森移液器,銳寧移液器,大龍移液器,寶予德移液器

離心機:Eppendorf離心機,盧湘儀離心機,蜀科離心機,安亭離心機,ABSON迷你離心機

PCR儀:賽洛捷克PCR儀,ABI普通PCR儀、ABI 7500/ 7500Fast實時定量PCR儀

Bio-rad產(chǎn)品:凝膠成像系統(tǒng)、Bio-rad電源,Bio-rad電泳槽、Bio-rad轉(zhuǎn)移槽,玻璃板

箱體產(chǎn)品:一恒培養(yǎng)箱、一恒干燥箱,一恒恒溫搖床,安泰超凈臺,中科美菱超低溫冰箱

試劑類:

gegenetech醫(yī)藥中間體全線產(chǎn)品:總代理

Abbkine全線產(chǎn)品:上海區(qū)域一級代理

MCE小分子抑制劑,激動劑全線產(chǎn)品:上海區(qū)域一級代理

Bioteke核酸提取及分子試劑全線產(chǎn)品:上海區(qū)域一級代理

Thermo scientific部分產(chǎn)品:上海區(qū)域特約經(jīng)銷商

NEB全線產(chǎn)品:上海區(qū)域特約經(jīng)銷商

耗材類:

Axygen全線產(chǎn)品:全國特約經(jīng)銷商

Corning全線產(chǎn)品:全國特約經(jīng)銷商

BD 耗材產(chǎn)品:上海區(qū)域特約經(jīng)銷商

NEST耗材產(chǎn)品:上海區(qū)域特約經(jīng)銷商








分子,蛋白及細胞技術(shù)服務(wù),生物儀器,生物試劑,生物耗材

 熒光定量PCR技術(shù)與普通PCR的區(qū)別:
  理論上PCR是一個指數(shù)增長的過程,但是實際的PCR擴增曲線并不是標(biāo)準(zhǔn)的指數(shù)曲線,而是S形曲線。
  這是因為隨著PCR循環(huán)的增多,擴增規(guī)模迅速增大,Taq酶、dNTP、引物,甚至DNA模板等各種PCR要素逐漸不敷需求,PCR的效率越來越低,產(chǎn)物增長的速度就逐漸減緩。當(dāng)所有的Taq酶都被飽和以后,PCR就進入了平臺期。由于各種環(huán)境因素的復(fù)雜相互作用,不同的PCR反應(yīng)體系進入平臺期的時機和平臺期的高低都有很大變化,難以精確控制。所以,即使是96次PCR重復(fù)實驗,各種條件基本*,所得結(jié)果有很大差異,所以在實驗過程中我們不能根據(jù)zui終PCR產(chǎn)物的量直接計算出起始DNA拷貝數(shù)。


  熒光定量PCR的方法:
  熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應(yīng)的可分為特異類和非特異類兩類,特異性檢測方法是在PCR反應(yīng)中利用標(biāo)記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產(chǎn)物;而非特異性檢測方法是在在PCR反應(yīng)體系中,加入過量熒光染料,熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射出熒光信號。前者由于增加了探針的識別步驟,特異性更高,但后者則簡便易行。
  熒光定量PCRzui常用的方法是DNA結(jié)合染料SYBR GreenⅠ的非特異性方法和Taqman水解探針的特異性方法,在這里主要介紹這2種方法,其它方法請參考其它熒光定量PCR資料。
  1、非特異性SYBR Green I染料法
  SYBR Green I是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有綠色激發(fā)波長的染料(結(jié)合示意圖),在游離狀態(tài)下,SYBR Green I發(fā)出微弱的熒光,但一旦與雙鏈DNA結(jié)合后,熒光大大增強(作用機理圖)。因此,SYBR Green I的熒光信號強度與雙鏈DNA的數(shù)量相關(guān),可以根據(jù)熒光信號檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。
  2、特異性Taqman水解探針法
  Taqman熒光定量技術(shù)是以Taqman熒光探針為基礎(chǔ),Taqman熒光探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個熒光發(fā)射基團和一個熒光淬滅基團。探針完整時,發(fā)射基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;
  PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使熒光發(fā)射基團和熒光淬滅基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。從而實現(xiàn)定量(如下圖)。常用的熒光基團是FAM, TET, VIC, HEX。


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