上海過表達(dá)真核質(zhì)粒構(gòu)建

上海過表達(dá)真核質(zhì)粒構(gòu)建

實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡介：慢病毒（ Lentivirus ）載體是以 HIV-1 （人類免疫缺陷1型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體, 屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，為RNA病毒。區(qū)別于一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體 上，從而達(dá)到持久性表達(dá)。目前慢病毒也被廣泛地應(yīng)用于表達(dá) RNAi 的研究中。由于體外合成 siRNA 對基因表達(dá)的抑制作用通常是短暫的，因而使其應(yīng)用受到較大的限制。基于慢病毒載體設(shè)計的shRNA , 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄 siRNA 的策略，不但使有效轉(zhuǎn)染的細(xì)胞種類增加，而且長期穩(wěn)定抑制目的基因在細(xì)胞中表達(dá)。在感染能力方面可有效地感染神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi) 皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型細(xì)胞，從而達(dá)到良好的基因治療效果，在美國已經(jīng)開展了臨床研究，效果非常理想，因此具有廣闊的應(yīng)用前景。

miRNA質(zhì)粒表達(dá)載體是將含發(fā)卡結(jié)構(gòu)的miRNA構(gòu)建在含特殊啟動子的質(zhì)粒表達(dá)載體，該載體轉(zhuǎn)入細(xì)胞后可利用細(xì)胞內(nèi)的miRNA加工成熟機(jī)制獲得成熟的miRNA并發(fā)揮作用。
上海過表達(dá)真核質(zhì)粒構(gòu)建

1 、服務(wù)流程：
a) 提供您所需要構(gòu)建miRNA名稱，miRbase登錄號或者序列，由我公司專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計并給出報價；
b) 簽訂miRNA質(zhì)粒載體構(gòu)建合成合同，支付預(yù)付款；
c) 設(shè)計合成引物， PCR反應(yīng)擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物酶切；
d) 將酶切產(chǎn)物純化，克隆至miRNA表達(dá)質(zhì)粒載體系統(tǒng)；
e) 后通過DNA測序，確認(rèn)插入片段的準(zhǔn)確性；
f)  miRNA表達(dá)載體合成結(jié)束，發(fā)貨并向客戶提供實(shí)驗(yàn)報告。

2 、提供結(jié)果
a)質(zhì)粒；
b) 測序圖譜/序列；
c) miRNA載體構(gòu)建報告書。