上海過表達真核質(zhì)粒構(gòu)建

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實驗技術(shù)簡介：慢病毒（ Lentivirus ）載體是以 HIV-1 （人類免疫缺陷1型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體, 屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，為RNA病毒。區(qū)別于一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體 上，從而達到持久性表達。目前慢病毒也被廣泛地應用于表達 RNAi 的研究中。由于體外合成 siRNA 對基因表達的抑制作用通常是短暫的，因而使其應用受到較大的限制。基于慢病毒載體設(shè)計的shRNA , 轉(zhuǎn)移到細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄 siRNA 的策略，不但使有效轉(zhuǎn)染的細胞種類增加，而且長期穩(wěn)定抑制目的基因在細胞中表達。在感染能力方面可有效地感染神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內(nèi) 皮細胞、干細胞等多種類型細胞，從而達到良好的基因治療效果，在美國已經(jīng)開展了臨床研究，效果非常理想，因此具有廣闊的應用前景。

miRNA質(zhì)粒表達載體是將含發(fā)卡結(jié)構(gòu)的miRNA構(gòu)建在含特殊啟動子的質(zhì)粒表達載體，該載體轉(zhuǎn)入細胞后可利用細胞內(nèi)的miRNA加工成熟機制獲得成熟的miRNA并發(fā)揮作用。
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1 、服務(wù)流程：
a) 提供您所需要構(gòu)建miRNA名稱，miRbase登錄號或者序列，由我公司專業(yè)技術(shù)人員進行實驗設(shè)計并給出報價；
b) 簽訂miRNA質(zhì)粒載體構(gòu)建合成合同，支付預付款；
c) 設(shè)計合成引物， PCR反應擴增及PCR產(chǎn)物酶切；
d) 將酶切產(chǎn)物純化，克隆至miRNA表達質(zhì)粒載體系統(tǒng)；
e) 后通過DNA測序，確認插入片段的準確性；
f)  miRNA表達載體合成結(jié)束，發(fā)貨并向客戶提供實驗報告。

2 、提供結(jié)果
a)質(zhì)粒；
b) 測序圖譜/序列；
c) miRNA載體構(gòu)建報告書。