N100 常規(guī)抗生素實(shí)驗(yàn)牛津杯小鋼管

常規(guī)抗生素實(shí)驗(yàn)牛津杯小鋼管

     本公司生產(chǎn)常規(guī)抗生素實(shí)驗(yàn)牛津杯小鋼管適用于抗生素原料藥、制劑的生物效價(jià)測(cè)定。符合《中華人民共和國(guó)藥典》、《中華人民共和國(guó)獸藥典》、《國(guó)家*標(biāo)準(zhǔn)》、《*標(biāo)準(zhǔn)》、《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》、《進(jìn)口獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》所規(guī)定。

    抗生素管碟檢定法是利用抗生素在攤布特定試驗(yàn)菌的固體培養(yǎng)基內(nèi)呈球面形擴(kuò)散，形成含一定濃度抗生素球形區(qū)，抑制了試驗(yàn)菌的繁殖而呈現(xiàn)出透明的抑菌圈。此法系根據(jù)抗生素在一定濃度范圍內(nèi)，對(duì)數(shù)劑量與抑菌圈直徑（面積）呈線性關(guān)系，通過(guò)比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品產(chǎn)生抑菌圈的大小，計(jì)算出供試品的效價(jià)。

    ， 內(nèi)徑6.0±0.1mm，外徑7.8±0.1mm，高10.0±0.1mm，每盒100支小鋼管重量差異不超過(guò)±0.05g，內(nèi)外壁及兩端面光潔平坦，管壁厚薄*。配合牛津杯鋼管自動(dòng)放置器使用，可以有效降低誤差。

雙碟的制備

1  倒底層培養(yǎng)基

    將培養(yǎng)基于水浴或微波爐中加熱融化，冷卻至60～70℃。將雙碟按編號(hào)平擺在水平操作臺(tái)上，用滅菌大口吸管吸取培養(yǎng)基20ml于雙碟內(nèi)，使其在碟底均勻分布，等凝固后更換干燥的陶瓦蓋。同時(shí)用紫外光燈消毒潔凈室。

2  加菌層培養(yǎng)基

    將已經(jīng)加熱融化的菌層培養(yǎng)基冷卻至48～50℃(芽孢可至60℃)，以無(wú)菌操作加入適量試驗(yàn)菌懸液，搖勻，用滅菌刻度吸管吸取菌層培養(yǎng)基5ml，使均勻攤布在底層培養(yǎng)基上，置水平操作臺(tái)上，用陶瓦蓋覆蓋，放置20～30分鐘，待凝固，備用。加菌液量，事*行預(yù)測(cè)，二劑量法高濃度抑菌圈直徑應(yīng)控制在18～22mm之間，三劑量法中心濃度的抑菌圈直徑應(yīng)控制在15～18mm之間。

滴定和培養(yǎng)

1  每批樣品用九只雙碟，用鋼管放置器，二劑量法每碟安置四個(gè)小鋼管，三劑量法每碟安置六個(gè)小鋼管

2  滴加標(biāo)準(zhǔn)品與供試品溶液，因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)不同而異。二劑量法，每碟中對(duì)角的兩個(gè)小鋼管分別滴加高、低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其余兩個(gè)小鋼管分別滴加相應(yīng)的高、低兩種濃度的樣品溶液。三劑量法的6個(gè)鋼管中間隔3個(gè)鋼管中分別滴加標(biāo)準(zhǔn)品及供試品高（H）、中（M）、低（L）3種濃度的溶液，并使相同濃度成對(duì)角。滴加量以與小鋼管口齊平為宜，各鋼管加入量應(yīng)盡量*。滴加溶液的順序，二劑量法應(yīng)按照S_H→T_H→S_L→T_L的順序滴加；三劑量法應(yīng)按照S_H→T_H→S_M→T_M→S_L→T_L的順序滴加。 滴加溶液的時(shí)間不可過(guò)長(zhǎng)，一般二劑量法，九只雙碟應(yīng)在3分鐘之內(nèi)滴加完畢。

3  滴碟完畢，將雙碟以水平方向搬至托盤(pán)上，并用陶瓦圓蓋蓋好，平穩(wěn)地移入恒溫室或恒溫箱,在規(guī)定溫度下培養(yǎng)至所需時(shí)間。

結(jié)果計(jì)算

    將培養(yǎng)好的雙碟取出，倒出小鋼管，測(cè)量前，應(yīng)檢查各抑菌圈是否圓整，如發(fā)現(xiàn)破圈或不圓整應(yīng)棄之。由儀器測(cè)量各抑菌圈的直徑或面積，并按生物檢定統(tǒng)計(jì)法進(jìn)行可靠性測(cè)驗(yàn)、效價(jià)計(jì)算及可信限計(jì)算。對(duì)于同一批樣品多次測(cè)定結(jié)果應(yīng)進(jìn)行合并計(jì)算，參加合并計(jì)算的每組數(shù)據(jù)中各技術(shù)參數(shù)均應(yīng)符合要求，合并計(jì)算結(jié)果應(yīng)均一，參加合并計(jì)算的初試與復(fù)試組數(shù)應(yīng)接近。

特別要注意：

     不同次購(gòu)買(mǎi)的鋼管必須同時(shí)進(jìn)行重量挑選，即每套鋼管重量差異不超過(guò)±0.05g。挑選時(shí)可將新舊批次的鋼管分別混合均勻，并分別隨機(jī)取出40個(gè)稱(chēng)定，求出新舊鋼管的平均重量，若新舊鋼管混合后的平均重量接近（相差≤5mg）求出新舊鋼管混合后的平均重量m，按照此重量對(duì)新舊鋼管進(jìn)行重量挑選，新舊鋼管混合使用。若新舊鋼管平均重量之差超過(guò)5mg，按照新鋼管平均重量對(duì)新鋼管進(jìn)行重量挑選，新舊鋼管分開(kāi)使用。