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新西蘭TCB胎牛血清進口報關怎么操作？

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　　個人如何量進口新西蘭TCB胎牛血清？

　　進口新西蘭TCB胎牛血清沒有3C和原產地證怎么辦？

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　　鑒于進口胎牛血清貨源緊張，價值昂貴，因此胎牛血清進口清關的安全可靠性就顯得尤為重要。挑選進口胎牛血清清關商時一定要擦亮眼睛，尋找專業(yè)的清關商。因為胎牛血清從香港進口是一條極為便利的渠道，因此很多中港物流公司見有利可圖就紛紛接單，但絕大多數公司的各種條件并不符合胎牛血清清關的苛刻要求。

　　新西蘭TCB胎牛血清進口到中國三種方式：直郵、一般貿易進口、快件進口，進口新西蘭TCB胎牛血清優(yōu)勢。

　　進口新西蘭TCB胎牛血清上海青旗報關具有如下優(yōu)勢：

1，不需要任何資質，個人也可以大量進口新西蘭TCB胎牛血清；

2，缺乏3C和單證也可以從新西蘭操作進口TCB胎牛血清事宜；

3，包稅清關，極大地節(jié)省了新西蘭TCB胎牛血清進口的成本；

4，極速到貨，新西蘭TCB胎牛血清進口到中國全程只需要10天時間；

5，省心舒心，一站式服務，進口新西蘭TCB胎牛血清就跟發(fā)國內物流一樣簡單。

　　一，特級胎牛血清進口

Hyclone特級胎牛血清

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Bioind特優(yōu)級胎牛血清

　　二，優(yōu)級胎牛血清進口

Hyclone加拿大優(yōu)等胎牛血清

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　　然而，為防止國外疾病入侵，保障我國生物學安全，我國對很多國家血源的胎牛血清執(zhí)行禁止進口的政策。從而導致了進口血清*的局面，大家所熟知的GIBCO胎牛血清，貨號為16000-044，其價格曾經漲到8000元的天價，還供不應求。因此如何想辦法進口Gibco胎牛血清是很多貿易商面臨的首大難題。

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　　為滿足廣大進口胎牛血清客戶的需求，上海青旗生物打造了一條專業(yè)可靠的胎牛血清進口渠道。

TCB牛血清使用方法

在細胞培養(yǎng)過程中，經常加入5%-20%的胎牛血清，常使用的Bovogen胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜，影響后續(xù)實驗的結果，我們在實驗中使用10%的Bovogen澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細胞，效果非常好。但是有些細胞也會使用5%的Bovogen FBS或者20%的Bovogen胎牛血清，要根據具體 細胞選擇合適的Bovogen胎牛血清濃度。

TCB胎牛血清FBS保存方法

1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在 37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞，而影響血清質量。如果一次無法用完一瓶,可 將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前，必須預留一 定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。

2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內一起過濾,切勿直接 過濾血清。

3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而 出現沉淀。

4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體 參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞 發(fā)生化學趨化和活化。

5、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身 的質量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點":經過熱處理過的血清,沉淀物 的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染。一般情況下,此小黑 點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清。

TCB胎牛血清(Bovogen血清)使用中遇到的常見問題總結

一、TCB血清滅活問題。

1、問：加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎？

答：不是必須的，看做什么實驗了。

2、問：TCB胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎？

答：如果用于培養(yǎng)大多數的腫瘤細胞，血清一般是不需要滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長因子。 但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補體受體的細胞，如內皮細胞，血清是需要滅活，一般是56℃，30min。

3、問：我要做滋養(yǎng)細胞培養(yǎng)，胎牛血清要滅活嗎？

答：進口的一般都已滅活，國產的不一定，還是滅活一下再用較安全。

4、問：我用病毒上清轉染細胞，培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎？因為血清中可能有些補體和抗體，是不是會影 響轉染？我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結合，影響轉染，正確嗎？細胞是單核細胞白血病細胞， 病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時，目的是什么？

答：血清一定要滅活，可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結合過程的干擾，一般是2-6小時，根據細胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活，滅活的目的是將血清中的補體滅活 ！這要根據實際情況而定，如果沒有把握那就滅活吧，也不麻煩56度半個小時。

四、FBS可否代替人AB型血清？

問：我現在在做人的外周血b淋巴細胞的培養(yǎng)，文獻上要求用人的AB型血清，但是我覺得很多代理商都沒有 。我想FBS代替，但不知道可否，我先是擔心免疫排斥之類，但是我查了些資料后，應該不會(我覺得)。但是我又不 能夠TRY。因為細胞因子確實太貴了，所以咨詢一下。謝謝！

答：你照文獻的做。除非你系列實驗證明你用代用品的結果與文獻的相同(你還是要用到文獻的試劑) 。細胞培養(yǎng)的影響因素很多，特別是培養(yǎng)基的成分。

五、血清的制備方法問題。

1、問：我的實驗需要自己制備一些血清用于培養(yǎng)細胞，有沒有人知道用于培養(yǎng)細胞的血清需要怎樣的制備 過程？

答：自己制備血清當心污染啊。如果無菌條件好的話，用靜置析出方法就行。

2、問：一般我們用得胎牛血清用前還要滅活，我想用大鼠的血，不知道要不要滅活？

答：你直接把采來的血液在離心管里4℃過夜，離心，取上清，在無菌過濾，也可滅活，然后分裝凍存，用 時再配。

3、問：如果滅活會不會對血清中的一些因子有損傷？

答：加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺， 激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。滅活 一般不會對血清中的一些因子損傷的。

六、心肌細胞原代培養(yǎng)時血清的使用問題。

1、問：在進行心肌細胞原代培養(yǎng)時，需要用含血清的培養(yǎng)基中止胰酶的消化作用，我現在使用的是含血清 10%的培養(yǎng)液，但近日看北醫(yī)一個細胞培養(yǎng)的課件發(fā)現，有用1%血清培養(yǎng)液進行中止消化的，想問一下，1%的是否可 以，效果是否有保證？這樣確實能節(jié)省不少血清的。

答：關于心肌細胞元代培養(yǎng)的FBS問題：

(1)1%的血清*培養(yǎng)基可不可以，得看你胰酶的用量。但是在心肌細胞元代培養(yǎng)就不行。 10%的FBS* 培養(yǎng)基效果都不太好，開始心肌細胞元代培養(yǎng)需要高濃度的FBS，20%左右，但這就有出現另一個問題，在FBS*培 養(yǎng)基中，成纖維細胞呈優(yōu)勢細胞，須得在培養(yǎng)基加入適量的BrdU以抑制其生長，純化心肌細胞。

(2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白質如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用 。

(3)元代心肌細胞培養(yǎng)的FBS使用，有講究：剛開始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無血清的 DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)。

2、問：我胰酶的用量是0.08% ，并混和了0.08%的膠原酶。FBS要高濃度遞減是否是說的在細胞培養(yǎng)中啊， 難道在消化時終止也需要如此高的濃度嗎，還有，我的BRDU只用到48小時就不用了，因為擔心其損傷太大，可以持續(xù) 用多久呢？

答：我用10%FBS終止的，然后差速1h，然后還是用10%FBS的HG-dmem養(yǎng)的，沒有用brdu，心肌細胞還是比 較多和穩(wěn)定的，我第3天就可以用，第2天晚上看就會有搏動。