ELISA加樣如何避免氣泡？為何避免氣泡？

通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍，導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。很多說(shuō)明書、教科書上也都提到，加樣時(shí)要避免出現(xiàn)氣泡，這到底是什么原因呢？因?yàn)樵谧鰧?shí)驗(yàn)的過(guò)程中，有時(shí)為了打干凈槍頭里面的液體，很容易產(chǎn)生氣泡，是不是這樣對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)后什么影響？

1、包被時(shí)有氣泡的話，將導(dǎo)致包被不*實(shí)際包被量下降--弱陽(yáng)性甚至假陰性。

2、封閉時(shí)有氣泡的話，將導(dǎo)致大量未結(jié)合位點(diǎn)的存在，引起非特異性結(jié)合--本底增高，假陽(yáng)性。

3、加樣時(shí)有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結(jié)合--弱陽(yáng)性甚至假陰性。

4、加二抗時(shí)有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結(jié)合--弱陽(yáng)性甚至假陰性（競(jìng)爭(zhēng)法相反----假陽(yáng)性）。

5、加顯色液時(shí)有氣泡的話--－顯色不*。

6、加終止液時(shí)有氣泡的話（1、不能*終止反應(yīng) 2、影響酶標(biāo)儀比色，OD值增高）

7、洗滌時(shí)有氣泡的話，非特異性結(jié)合物不能*洗去，做無(wú)用功。

避免方法：

1、加樣時(shí)盡量靠近孔底（不要接觸孔底），用力均勻，不要過(guò)快過(guò)猛。

2、封閉時(shí)一定要加滿孔。

3、洗滌時(shí)一定要加滿孔(重要），氣泡會(huì)浮上來(lái)最終驅(qū)除。手工洗板時(shí)一定要吸干水分并用力拍干。