血清/血漿外泌體提取試劑盒

■血清/血漿外泌體提取試劑盒 產(chǎn)品簡介：
Exosome（外泌體）是活細胞分泌的直徑約為30-150nm間的膜性囊泡，其天然存在于生物的體液中，包括血液、尿液、唾液、腦脊液、乳液等。Exosome中攜帶有細胞溶質蛋白、smRNA、各種代謝酶等，參與各種細胞功能調控，有望成為多種疾病的早期診斷標志物。近期的研究發(fā)現(xiàn)外泌體還可以運輸核酸，參與細胞間通訊，參與細胞間的物質交換和信息交流，影響細胞的生理狀態(tài)，并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關。Exosome在藥物載體運輸，腫瘤生物學和基因調控研究等方向已經(jīng)成為研究熱點。
本公司Exosome Isolation Regent用于高效、快速、方便的從血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織液中體取exosome的試劑盒。僅需通過簡單操作和常規(guī)離心機即可從樣本內中獲取大量結構完整的exosome。相比傳統(tǒng)的超速離心法，Exosome Isolation Regent提取效率更高，更節(jié)省時間和樣本，提取的exosome可用于Western Bloting、qPCR、功能驗證、Elisa等后續(xù)實驗。

■血清/血漿外泌體提取試劑盒試劑盒適用范圍：
本試劑盒只適用于血清或血漿的外泌體提取，僅用于科學研究。

■試劑組分：


■保存條件：
請于4°C保存，可穩(wěn)定保存一年。（可常溫運輸）

■流程介紹：
樣品預處理→沉淀外泌體→外泌體重懸→外泌體純化

■血清/血漿外泌體提取試劑盒樣品準備：
血清/血漿：
1凍存樣品，室溫或25℃水浴解凍，將*融化的樣品置于冰上；新鮮樣品，收集樣品后置于冰上，2000 g離心10 min, 以除去殘留細胞；
2 收集上清液，10000g離心10 min, 以除去細胞碎片；
3 收集上清液提取exosome或4°C保存。
注：如需進行下游核酸（DNA或RNA）相關實驗，建議樣品量不低于300 μl。

■ Exosomes提取：
（1）取300 μl上清液至新的離心管中，加入體積比為1：1的Exosome Isolation Regent A液；
（2）顛倒混勻3-5次后于4°C靜置5 min后 10000g 離心2 min；
（3）取上清液轉移置新的離心管中，加入體積比為1：1的Exosome Isolation Regent B液；
（4）顛倒混勻3-5次后于4°C靜置1h-2h后 13500 g 離心30 min后棄去上清液；收集沉淀，此沉淀即為外泌體；
（5）根據(jù)后續(xù)實驗加入100-200µl Exosome Isolation Regent C重懸沉淀物，進行后續(xù)實驗或-80°C保存（由于沉淀物的粘性較大，因此加入Exosome Isolation Regent C后室溫放置約15 min，用移液器吹打后沉淀物會自然溶解）。
注意：如對提取效率有要求，可適時延長離心時間10-30 min，總長不超過1h。

■ 常見問題：
Q1：提取的外泌體如何保存？
A1：外泌體可在2-8℃保存一周，若需長時間保存，建議放置于-80℃冰箱凍存，避免反復凍融。
Q2：如何鑒定提取的外泌體？
A2：外泌體是體細胞分泌的細胞外囊泡群體中一種，直徑一般為30-150nm，通常確定外泌體一般需要三個條件：透射電鏡（TEM）形態(tài)觀察，顆粒粒徑測定（NTA）和蛋白標志物檢測（外泌體標志蛋白有CD9、CD81、CD63、Alix、TSG101 等）。
Q3：將Exosome Isolation Reagent加入到體液樣本中后，顛倒混合。請問這一步是否可以用振蕩器劇烈震會對效果有影響？
A3：只需將Exosome Isolation與待提取樣品混合均勻即可，震蕩的強度不宜過分劇烈，劇烈震蕩會影響提取效果。
Q4：與超速離心方法相比本試劑盒提取外泌體方法有哪些優(yōu)勢？
A4：本試劑盒具有操作簡單，便捷，提取效率高，可達90%以上，不需要額外儀器設備，可小體積樣本提取等特點。