40304ES20 Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 檢測試劑盒
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 40304ES20
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2022/4/11 15:07:40
- 訪問次數(shù) 992
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 20T |
---|---|---|---|
貨號 | 40304ES20 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號
規(guī)格
價格(元)
*(元)
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 檢測試劑盒
40304ES20
20 T
518.00
386.00
40304ES50
50 T
1120.00
786.00
40304ES60
100 T
1960.00
1346.00
產(chǎn)品描述
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 檢測試劑盒(Annexin V-Alexa Fluor647/PI Apoptosis Detection Kit)是用Alexa Fluor647標(biāo)記了的Annexin V作為探針,來檢測細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生,可用流式細(xì)胞儀或其他熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。
其檢測原理為:在正常的活細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine,PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在早期凋亡的細(xì)胞中,PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin V(膜聯(lián)蛋白-V)是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力結(jié)合。可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。
另外,本試劑盒中還提供了碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)用來區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞。PI是一種核酸染料,它不能透過正常細(xì)胞或早期凋亡細(xì)胞的完整的細(xì)胞膜,但可以透過凋亡晚期和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此,將Annexin V與PI聯(lián)合使用時,PI 則被排除在活細(xì)胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡細(xì)胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞同時被Alexa Fluor647 和PI 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性(Annexin V+/PI+)。
本試劑盒需要使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。
產(chǎn)品組分組分編號
組分名稱
產(chǎn)品編號/規(guī)格
40304ES20(20T)
40304ES50(50T)
40304ES60(100T)
40304-A
Annexin V-Alexa Fluor647
100 μL
250 μL
500 μL
40304-B
PI Staining Solution (20 μg/mL)
200 μL
500 μL
1.0 mL
40304-C
1×Binding Buffer
10 mL
25 mL
50 mL
運輸與保存方法
冰袋(wet ice)運輸。-20 ℃避光保存,避免反復(fù)凍融,一年有效期。
【注】:如果需要在短時間內(nèi)多次重復(fù)使用,可以在4 ℃避光保存,半年有效期。
注意事項
1、由于細(xì)胞凋亡是一個快速的過程,建議樣品在染色后1小時之內(nèi)進(jìn)行分析。
2、對于貼壁細(xì)胞,消化是一個關(guān)鍵步驟。貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時如有漂浮細(xì)胞,需收集漂浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞后合并染色。處理貼壁細(xì)胞時要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。胰酶消化時間過短,細(xì)胞需要用力吹打才能脫落,容易造成細(xì)胞膜的損傷,PI攝入過多;消化時間過長,細(xì)胞膜同樣易造成損傷,甚至?xí)绊懠?xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-Alexa Fluor647的結(jié)合。消化時將胰酶鋪滿孔板底后,輕搖時胰酶與細(xì)胞充分接觸,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段時間,待細(xì)胞間空隙增大,瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA,EDTA會影響Annexin V與PS的結(jié)合。
3、如果樣品來源于血液,請務(wù)必除去血液中的血小板。因為血小板含有PS,能與Annexin V結(jié)合,從而干擾實驗結(jié)果。可以使用含有EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。
4、試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
5、Annexin V-Alexa Fluor647和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。
6、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
7、本產(chǎn)品僅作科研用途!
使用說明
1、 樣品染色
1.1、懸浮細(xì)胞:300 g,4℃離心5 min收集細(xì)胞。
貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300 g,4℃離心5 min收集細(xì)胞。胰酶消化時間不宜過長,以防引起假陽性。1.2、用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞2次,每次均需300g,4℃離心5 min。
1.3、吸棄PBS,加入100 μL 1×Binding Buffer重懸細(xì)胞。
1.4、加入5μL Annexin V-Alexa Fluor 647和10 μL PI,輕輕混勻。
1.5、避光、室溫反應(yīng)15 min。
1.6、加入400 μL 1×Binding Buffer,混勻后放置于冰上,樣品在1小時內(nèi)用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測。
【注】:為了避免洗滌細(xì)胞時損失細(xì)胞,在吸液時可以用大的Tip頭套上小的Tip頭吸液。
2、流式細(xì)胞儀分析
Alexa Fluor647最大激發(fā)波長為651 nm,最大發(fā)射波長為667 nm;PI-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)波長為535 nm,最大發(fā)射波長為615 nm。用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),Alexa Fluor647為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。每個樣采集10,000 events。
HB220222