葡萄糖氧化酶（GOD）測試盒

葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）試劑盒說明書

微量法

正式測定前取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義

GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產(chǎn)生H₂O₂ ，是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。

測定原理

GOD催化產(chǎn)生H₂O₂，過氧化物酶在有氧存在時催化H₂O₂分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì)，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關(guān)系。

試驗中所需的儀器和設(shè)備

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 19.2mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 1mL×1 支，4℃保存；

樣品測定的準備

組織處理：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

血清（漿）：直接檢測。

測定步驟

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至500nm，蒸餾水調(diào)零。

2、GOD 檢測工作液的配制：用時將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中，充分混勻，待用；用不完的試劑4℃可保存一周；

3、測定前將GOD檢測工作液在37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴10min以上。

4、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和240μL工作液，立即混勻并計時，記錄500nm下20s吸光值A(chǔ)1和1min20s后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA＝A2-A1。