Ar A4 感受態(tài)細胞

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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
殺菌；滲透增強蛋白樣檢測試劑盒  英文名稱:15-Hydroxydehydroabietic acid  純度：≥98%

死骨片1-泛素結(jié)合蛋白P62檢測試劑盒  英文名稱:9β,13β-Epidioxyabiet-8(14)-en-18-oic acid  純度：≥98%

轉(zhuǎn)錄激活因子MYB檢測試劑盒  英文名稱:6-Epidemethylesquirolin D  純度：≥98%

醌NADH脫氫酶1檢測試劑盒  英文名稱:Tanshinlactone  純度：≥98%

CCAAT增強子結(jié)合蛋白α檢測試劑盒  英文名稱:Przewalskin  純度：≥98%

甲基胞嘧啶雙加氧酶2檢測試劑盒  英文名稱:Deacetylpseudolaric acid A  純度：≥98%

淋巴增強因子-1檢測試劑盒  英文名稱:Pinusolidic acid  純度：≥98%

Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1檢測試劑盒  英文名稱:Deacetylpseudolaric acid C2  純度：≥98%

跨膜受體蛋白Notch-1檢測試劑盒  英文名稱:Phytol  純度：≥98%

白細胞介素36γ檢測試劑盒  英文名稱:Isocupressic acid  純度：≥98%

受體激酶c-Met檢測試劑盒  英文名稱:Spiramilactone B  純度：≥97%

 英文名稱:Cinnzeylanol  純度：≥98%

血清淀粉樣蛋白A2檢測試劑盒  英文名稱:Bulleyanin  純度：≥98%

血清淀粉樣蛋白A4檢測試劑盒  英文名稱:Forskolin J  純度：≥98%

信號素3E檢測試劑盒  英文名稱:19-Hydroxybaccatin III  純度：≥99%

血管緊張素Ⅲ檢測試劑盒  英文名稱:2-Deacetoxytaxinine B  純度：≥90%
Ar A4 感受態(tài)細胞NIR1/RDGBA3  膜相關(guān)脂轉(zhuǎn)運蛋白一抗    * 0.2ml Elaidic acid

Fc ε RIα/Fc epsilon RI  FC段IgE受體α多肽一抗    * 0.1ml Heptadecanoic acid

ELL  聚合酶延伸因子一抗    * 0.2ml Heptadecanoic acid

KNDC1  腦蛋白9一抗    * 0.2ml Leucomalachite Green

KCC2/SLC12A5  神經(jīng)細胞鉀離子轉(zhuǎn)運蛋白一抗    * 0.1ml Methyl Arachidate

SPP24/SPP2  分泌性蛋白24一抗    * 0.2ml Methyl ricinoleate

phosphoCaM I (Ser 101)  化鈣調(diào)節(jié)素一抗    * 0.1ml Methyl behenate

phosphoSYT6(Thr418)  化突觸蛋白6一抗    * 0.1ml Methyl tetracosanoate
操作方法：
1. 感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h。
基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構(gòu)成的生物膜，即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸：即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復制與轉(zhuǎn)錄的載體。
4、作為蛋白質(zhì)合成的機器—核糖體，毫無例外地存在于一切細胞內(nèi)，核糖體，是蛋白質(zhì)合成的機器，在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂。
6、能進行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動性，包括細胞自身的運動和細胞內(nèi)部的物質(zhì)運動
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
產(chǎn)品僅用于科研采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。