Biosharp Hoechst 33258染色試劑

產(chǎn)品簡介：

Hoechst染料是一類在顯微觀察中標記DNA的熒光染料。因為這類熒光染料能標記DNA，所以它們也經(jīng)常用于細胞核和線粒體的顯像觀察。這類染料中有兩個相關的染料Hoechst 33258和Hoechst 33342經(jīng)常使用。這兩種染料都在紫外光下350nm處被激發(fā)，都在461nm處*大發(fā)射光附近發(fā)射藍/青色熒光。Hoechst染料可以用于活細胞或者固定化細胞，并且經(jīng)常用來代替其它核酸染料如DAPI。這兩種染料關鍵的不同點在于，Hoechst 33342加有乙基，這使它具有更強的親脂性，因此能更好的透過完整的細胞膜。而且有些種類的細胞由于可以更有效地將進入細胞的Hoechst染料主動轉(zhuǎn)運到細胞外，因此在一些實驗中，Hoechst 33258的滲透性明顯比Hoechst 33342要弱些。這些染料也可以用來檢測樣品中的DNA含量，通過繪制發(fā)射光強度與DNA含量的標準曲線。

Hoechst 33342是一種可透過細胞膜并對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強烈的藍色熒光。Hoechst 33342常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33342-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長分別為350 nm和460 nm。

使用方法（適用于大多數(shù)細胞）：

一．對于固定的細胞或組織：

1．對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則*行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進行Hoechst 33342染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續(xù)的Hoechst 33342染色。

2．對于貼壁細胞或組織切片，可以在蓋玻片上或細胞培養(yǎng)板中原位染色，加入少量Hoechst 33342染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，并混勻。室溫放置3-5分鐘。

3．吸除Hoechst 33342染色液，用TBST 、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

4．直接在熒光顯微鏡下或封片后熒光顯微鏡下觀察。觀察細胞凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

二．對于活細胞或組織：

1．加入適當量Hoechst 33342染色液，必須充分覆蓋待染色的樣品，通常對于6孔板，一個孔需加入1ml 染色液，對于96 孔板每一個孔需加入100ul染色液。

2．在適宜于細胞培養(yǎng)的溫度培養(yǎng)20-30分鐘。棄染色液，用PBS或培養(yǎng)液洗滌2-3次即可進行熒光檢測。

注意事項：

1. 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。
2. Hoechst 33342對人體有一定刺激性，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：

-20℃避光保存，有效期2年。