S12020鏈親和素

英文名：Streptavidin

別名：鏈酶親和素；鏈霉親和素

CAS號：9013-20-1

MDL：MFCD00082035

介紹：鏈親和素（SA）是阿維丁鏈霉菌（Streptomyces avidinii）表達的一種小分子蛋白。本制品為127AA核心結(jié)構(gòu)，每分子SA結(jié)合4個生素分子，國際比活性12~15U/mg。SA與禽類親和素（Avidin，AV）相比特異性更強，與生素結(jié)合后半衰期長達6h，而AV半衰期僅為1h。由于SA不含糖基且等電點接近中性，因此SA在檢測應用中具有比AV更低的非特異性背景。

用途：本制品已廣泛應用于制備SA-偶聯(lián)酶制劑（如SA-HRP，SA-AP等），SA-偶聯(lián)熒光素（即熒光染料，如SA-FITC，SA-Cy2，SA-Cy3等）、SA-偶聯(lián)磁珠等，進而參與酶聯(lián)免疫吸附檢測（ELISA）、免疫組化、親和色譜填料、含StrepTagII標簽（8-AA寡肽）的蛋白純化、生物傳感器、生物納米微球、預靶向制藥研究、生物芯片被料等生物技術領域。

優(yōu)點：高親和力，高偶聯(lián)效率。

S12020鏈親和素注意事項：

1.凍干粉溶解后應避免反復凍融，建議分裝成小包裝后分別凍存。

2.凍干粉中含20mMNa2CO3 pH9.5的緩沖體系，若用于包被，酶標可以直接使用。若用于膠體金，調(diào)節(jié)pH或透析后使用。溶解后立即使用效果好，不能4℃長期存放。

3.若用于ELISA包板，膠體金烘金，硝酸纖維素膜上用SA劃線后需要烘干保存，包被液或緩沖液中需加入20%蔗糖作為活性保護劑。

【操作步驟簡述】

一、微孔板包被

1、用碳酸鈉緩沖溶液（pH 9.6）溶解凍干粉，將濃度稀釋成3-10ug/ml（客戶可設定梯度進行實驗）

注意：由于SA等電點是7.4，包被不建議使用中性緩沖液

2、用移液器吸取100ul/孔，4℃過夜包被或者37℃包被2h

3、洗滌：倒盡板孔中液體，加200ul洗滌液，靜放三分鐘，反復三次，最后將反應板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡，扣干

4、后續(xù)進入封閉、洗滌、抗原抗體結(jié)合流程

若不立即進入下游實驗，包被板需要進行烘干保存時。包被前，將包被液中加入20%蔗糖作為活性保護劑。

二、SA偶聯(lián)磁珠

2.1、NHS 活化

1、充分混勻磁珠后，取100μl PangoBeads COOH磁珠到1.5 ml離心管中，置于磁性分離上，待固液分離后去除上清液；

2、取200μl MES溶液（25mM，pH 5.0）加入到離心管中，置于磁性分離上，待固液分離后去除上清液。重復該步驟1 次；

3、迅速加入新配制的50μl EDC溶液和50μl NHS溶液 （均為50mg/ml， 以上述MES 配制）到裝有磁珠的離心管中，漩渦混勻使磁珠充分懸浮，室溫下垂直混合30min； 

4、反應結(jié)束后，加入100μl上述 MES溶液洗滌2次；（活化狀態(tài)不宜長時間保存， 建議立即進行偶聯(lián)）。

2.2、蛋白偶聯(lián)

1、將離心管置于磁性上，分離去除上清液，加入100μl蛋白溶液（25mM MES，pH5.0） 輕柔地混勻；（蛋白濃度在0.1-2.0mg/ml）

2、在室溫下垂直混合反應2h，或在4℃條件下垂直混合過夜；

3、反應結(jié)束后將離心管置于磁分離架上，磁性分離去除上清液，加入1ml乙醇胺溶液 （3M，pH9.0）洗滌磁珠2次；

4、加1ml乙醇胺溶液（3M, pH9.0）于離心管中，渦旋30s，將離心管置于垂直混合 儀中室溫反應1-2h；

5、反應結(jié)束后，將離心管置于磁力架上，待固液分離后移除上清液，然后加入100μl純化水輕柔渦旋30s，磁吸分離，重復該步驟1次；

6、加入適量的保存液（可根據(jù)需要來確定保存溶液的加入量，以調(diào)整偶聯(lián)配體磁珠的加入適量的保存液（可根據(jù)需要來確定保存溶液的加入量，以調(diào)整偶聯(lián)配體磁珠的濃度）保存于4°，如果固定的生物配體穩(wěn)定，可以在保存溶液中加入0.02%（W/V）作為抑菌劑。

外觀： 凍干粉

敏感性： 對熱敏感,易吸潮

儲存條件： -20℃

S12020鏈親和素用途： Applications for enzyme-labeled (HRP, AP) streptavidin: Enzyme immunoassays (EIA), including enzyme-linked immunsorbent assays (ELISA) with biotinylated antibodies Cell and tissue staining (for light microscopy) Western blotting (WB) and other membra

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