XSL0082 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型動物造模

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型動物造模

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯南到y(tǒng)性自身免疫性疾病。以慢性、 進(jìn)行性、侵襲性關(guān)節(jié)部位炎癥為主要表現(xiàn)，臨床特征為關(guān)節(jié)紅腫疼痛甚至僵直、破骨細(xì)胞的形成以及關(guān)節(jié) 骨質(zhì)受損等，嚴(yán)重可導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形乃至功能喪失，致殘率高。RA多發(fā)于中老年女性人群，我國整體發(fā)病率 約0.3-0.4%。發(fā)病機(jī)制尚不明確，可能由遺傳、感染、環(huán)境等因素綜合導(dǎo)致。 目前臨床治療RA仍以非甾體抗炎藥和抗風(fēng)濕類藥物如甲an蝶呤、柳dan磺吡啶、羥lv喹等。近年來抗體類藥 物發(fā)展迅速，如TNF-α單抗（Infliximab，Adalimumab）、IL6受體單抗（Tocilizumab）、CD20抗體 （Rituximab）等藥物對于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療能夠取得較為理想的療效。 目前類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的動物模型主要分為佐劑誘導(dǎo)（AIA）和膠原（CIA）誘導(dǎo)兩種，其中由于CIA模型通 常可在小鼠上成模而使用范圍更廣。 膠原誘導(dǎo)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（CIA）模型 應(yīng)用DBA/1小鼠，第0天注射Ⅱ型膠原蛋白與弗氏完quan佐劑（CFA），第21天注射Ⅱ型膠原蛋白與非弗氏 完quan佐劑（IFA），可誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎發(fā)生，小鼠發(fā)病程度、節(jié)點(diǎn)較為穩(wěn)定，嚴(yán)重程度區(qū)分度較高，適用 于抗自體免疫性疾病藥物的評價。

a. 臨床評分與細(xì)胞因子檢測 Ⅱ型膠原蛋白免疫2次之后，DBA/1小鼠陸續(xù)發(fā)病且嚴(yán)重程度隨時間升高。每日根據(jù)炎癥嚴(yán)重程度進(jìn)行評 分可見，模型組病變較嚴(yán)重，而IL17抗體作為陽參試劑可顯著控制疾病發(fā)生發(fā)展，并抑制發(fā)病率的持續(xù)增加。

圖：注射CII膠原造模后28-42天內(nèi)，關(guān)節(jié)炎評分和發(fā)病率持續(xù)增加，血漿炎癥因子IL6水平激增；給予 IL17A抗體后，發(fā)病和炎癥因子水平皆受到抑制。

實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)收集小鼠血漿通過ELISA檢測PD Marker IL-6的血漿濃度，可見模型組IL-6含量顯著升高，抗體可抑制IL-6升高的趨勢

圖：注射CII膠原造模后28-42天內(nèi)，關(guān)節(jié)炎評分和發(fā)病率持續(xù)增加，血漿炎癥因子IL6水平激增；給予 IL17A抗體后，發(fā)病和炎癥因子水平皆受到抑制。

b. Micro-CT和病理學(xué)檢查

實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)對小鼠腳趾、踝關(guān)節(jié)進(jìn)行Micro-CT檢查和病理學(xué)分析。Micro-CT檢查顯示，模型組小鼠關(guān)節(jié)骨質(zhì)受到嚴(yán)重?fù)p傷，而抗體產(chǎn)生了顯著保護(hù)作用。

圖：Micro-CT結(jié)果顯示，關(guān)節(jié)炎造模使小鼠骨關(guān)節(jié)受到顯著破壞，產(chǎn)生骨質(zhì)損傷；IL17A抗體可顯著逆轉(zhuǎn)骨關(guān)節(jié)損傷

佐劑關(guān)節(jié)炎模型

造模機(jī)制

佐劑可引起局部淋巴結(jié)的炎癥反應(yīng)，有利于刺激免疫細(xì)胞的增殖作用。用福氏完quan佐劑(complete Freund's adjuvant,CFA)免疫動物，可刺激免疫細(xì)胞的增殖，使動物機(jī)體免疫功能異常增高，產(chǎn)生針對關(guān) 節(jié)滑膜的自身免疫反應(yīng)，免疫復(fù)合物沉積在關(guān)節(jié)腔內(nèi)，產(chǎn)生類似于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的改變。

實(shí)驗(yàn)方法

用液狀石蠟與無水羊毛脂按2:1或6:4比例混合，加入80℃滅活卡介苗(BEG)，調(diào)制成濃度為10g/L的BCG乳 劑，充分碾磨，形成油包水乳劑。將充分乳化混勻的CFA在大鼠后肢足跖部皮下注射法，一側(cè)一次注入 0.1ml。CFA注射后，觀察大鼠的反應(yīng)、關(guān)節(jié)腫脹情況、組織病理學(xué)改變以及淋巴細(xì)胞亞群的改變。該模型 叫AA(adjuvant arthritis)大鼠模型。

注意： ①配制CFA時，應(yīng)將各種成分在研缽中充分研磨，或用三通管連接兩個注射器反復(fù)推注，充分混 勻，形成油包水乳劑，以延緩佐劑吸收，長時間刺激免疫系統(tǒng)。 ② 年幼(<21日齡)或年長(>9個月齡)的大鼠均不易誘導(dǎo)佐劑性關(guān)節(jié)炎。

模型特點(diǎn)

AA模型原發(fā)病變主要表現(xiàn)為局部的炎性反應(yīng)，續(xù)發(fā)病變一般于致炎后10～20天左右出現(xiàn)，20天左右達(dá)到 高峰。炎癥以踝關(guān)節(jié)為重，可侵及足墊、全足。病理改變?yōu)榛は陆M織炎癥，滑膜增生，血管翳形成，軟 骨破壞；4周后，關(guān)節(jié)紅腫減退，骨質(zhì)減少，新骨形成，關(guān)節(jié)間隙變窄，形成不可逆的關(guān)節(jié)改變。

卵蛋白性關(guān)節(jié)炎模型

建模方法

將卵蛋白溶解于生理鹽水配成20g/L的溶液，然后與等量弗氏佐劑充分混合。動物背部皮下注射，1次/周， 連續(xù)3周致敏，末次注射后2周于關(guān)節(jié)內(nèi)注入5mg溶解的卵蛋白。

模型特點(diǎn)

注射后24h內(nèi)，模型動物注射部位關(guān)節(jié)出現(xiàn)紅腫熱痛等急性炎癥的表現(xiàn)，發(fā)病率達(dá)100 ％。卵蛋白誘發(fā)的關(guān) 節(jié)炎模型的病理改變有增生、血管翳形成和軟骨及骨破壞。第yi階段為關(guān)節(jié)內(nèi)注入抗原后24h關(guān)節(jié)腫脹。關(guān)節(jié)直徑可增加32%，病理表現(xiàn)為急性滑膜炎大量滲出液，隨后關(guān)節(jié)腫脹有所減輕，但仍比正常關(guān)節(jié)腫大，第二階段為1-4周，關(guān)節(jié)滑膜明顯增生，血管醫(yī)形成，滑膜細(xì)胞有1-3層增至5-10層以單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞為主，其次為淋巴細(xì)胞，以CD4+淋巴細(xì)胞多見。這一階段部分動物可出現(xiàn)早期軟骨破壞。 第三階段在4周后，不可逆的關(guān)節(jié)軟骨及骨破壞出現(xiàn)，有軟骨細(xì)胞的壞死、軟骨纖維化、軟骨下新骨形 成，最后可出現(xiàn)骨變形。直到6個月觀察期，慢性炎癥仍存在。

比較醫(yī)學(xué)

卵蛋白誘發(fā)關(guān)節(jié)炎模型的發(fā)病機(jī)制主要是由于關(guān)節(jié)內(nèi)抗原的持續(xù)存在，刺激滑膜細(xì)胞分泌抗體，形成抗原 一抗體-C3復(fù)合物，使滑膜炎持續(xù)存在，滑膜增生，血管翳形成。用放射性同位素標(biāo)記的抗原注入兔關(guān) 節(jié)，觀察到抗原分布于無血管而富含纖維的組織，排泄緩慢，可持續(xù)存在6個月。卵蛋白誘發(fā)關(guān)節(jié)炎模型 可在兔、羊等動物上復(fù)制，由于不需要使用近交系動物，炎癥的發(fā)生易于復(fù)制，且關(guān)節(jié)相對較大，比較適 用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療研究，如光動力療法、wu創(chuàng)治療等。

需確認(rèn)的信息

1. 模型種屬（大鼠還是小鼠或是其他種屬）

2. 動物體重有無要求，年齡有無要求

3. 雌雄有無要求

4. 模型構(gòu)建具體方案

5. 取材要求（采血、取組織樣本）

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型動物造模