XSL0117 腎盂腎炎動物模型 泌尿系統(tǒng)模型

腎盂腎炎動物模型  泌尿系統(tǒng)模型

慢性腎盂腎炎動物模型

實驗方法

利用傾斜平板法制備100000000/ml及1000000/ml兩種濃度大腸埃希菌(O111B4)菌液待用，使用前測集落形成單位(CFU)值 核實濃度。體重200g左右雄性大鼠，術(shù)前常規(guī)禁水24h，先用細(xì)線扎住大鼠陰莖。在乙mi吸入麻醉下，動物仰臥固定于手術(shù) 板上，常規(guī)消毒腹部皮膚并去毛，沿下腹部正中切開，充分暴露左側(cè)輸尿管及膀胱，在輸尿管中段用10號半圓針、0號黑線 向側(cè)腹部穿針，暫不結(jié)扎。用注射器向膀胱內(nèi)注射100000000/ml濃度的菌液，每只注射量約0.5ml左右，常規(guī)手術(shù)關(guān)閉腹 腔。以適度松緊結(jié)扎側(cè)腹部黑線(24h后解除)，松開扎住陰莖的細(xì)線，術(shù)后恢復(fù)正常飲水與進(jìn)食。分別于實驗預(yù)定時間作腎 功能及血生化指標(biāo)測定；同時麻醉處死動物，取兩側(cè)腎臟，一半組織經(jīng)固定液固定，作常規(guī)組織切片，光鏡下病理檢查；另 一半組織勻漿后作細(xì)菌培養(yǎng)。處死動物前膀胱穿刺抽取尿液作細(xì)菌培養(yǎng)。

模型特點

模型動物術(shù)后90d時，均表現(xiàn)為尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)/尿肌酐明顯升高；模型制作過程中，24h尿蛋白定量無 明顯增加。血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)分別于30、60、90d檢測無明顯升高。術(shù)后第7日時，模型動物膀胱尿標(biāo)本及左腎組 織細(xì)菌培養(yǎng)為陽性，麥康凱培養(yǎng)基上為不透明紅色圓形菌落，血平板上則為稍凸、中等大小、邊緣整齊、不透明灰白色圓形 菌落；鏡下為革蘭氏染色陰性的粗短桿菌。細(xì)菌培養(yǎng)高陽性率可持續(xù)保持到術(shù)后第60日。肉眼觀察第7日時模型動物左側(cè)腎 臟明顯腫大，其表面可見粟粒樣膿腫，部分已融合成片；腎縱切面有膿腫形成；第15日時腎縱切面可見較多膿液，腎孟明顯 擴(kuò)張；第30日時腎臟腫脹部分減輕，外觀仍見膿腫；第60日腎臟體積腫大減輕；第90日時左腎可見明顯皮質(zhì)瘢痕形成，表 面凹凸不平，體積縮小。肉眼觀察未見右。腎有化膿灶或瘢痕形成，但可見右腎代償性增大。鏡下病理學(xué)觀察顯示，病變急 性期左腎腎盂黏膜上皮細(xì)胞壞死、脫落，腔內(nèi)積膿，腎實質(zhì)彌漫性化膿灶，小管腔內(nèi)可見白細(xì)胞管型；7～15d時淋巴細(xì)胞 浸潤明顯；30d可見間質(zhì)纖維組織增生，腎盂處瘢痕形成；60d時部分腎小球出現(xiàn)纖維化；90d時可見間質(zhì)纖維化，并有灶性淋巴細(xì)胞浸潤。 

急性腎盂腎炎動物模型

單純感染模型

實驗方法

體重為200g左右大鼠，禁止飲水24h后，事先用細(xì)線扎住大鼠陰莖。在乙mi吸入麻醉下，動物仰臥固定手術(shù)板上，常規(guī)消毒 腹部皮膚并去毛，沿動物下腹部作正中剪開，充分暴露膀胱，用注射器直接向膀胱內(nèi)一次性注射濃度為1000000/ml的大腸 埃希菌(O111B4)菌液，每只注射量約0.5ml，手術(shù)縫合切口，關(guān)閉腹腔。1h后松開扎陰莖細(xì)線。術(shù)后恢復(fù)動物正常飲水與進(jìn) 食。分別于預(yù)定時間處死動物，取其兩側(cè)腎臟，小心去除腎包膜；然后縱向切開腎臟，一半勻漿后行細(xì)菌培養(yǎng)，另一半置于 固定液中固定，作常規(guī)組織切片，HE染色，光鏡下觀察。同期膀胱穿刺作尿液細(xì)菌培養(yǎng)。

模型特點

術(shù)后3d尿液能培養(yǎng)出細(xì)菌，于麥康凱培養(yǎng)基上生長出紅色圓形菌落；至7d時仍有80％的動物細(xì)菌培養(yǎng)陽性，15d時則僅有少 數(shù)動物細(xì)菌培養(yǎng)陽性。腎組織細(xì)菌培養(yǎng)大部分動物雙腎細(xì)菌培養(yǎng)為陽性，部分動物為一側(cè)腎臟培養(yǎng)陽性。至第15日時，仍有 少數(shù)腎臟細(xì)菌培養(yǎng)陽性。大體標(biāo)本肉眼觀察可見模型動物雙腎體積均有不同程度增大，腎表面無明顯膿腫；其縱切面可見腎 盂擴(kuò)張，黏膜充血，腎皮質(zhì)、髓質(zhì)分界不清。鏡下病理學(xué)觀察顯示，3d時腎盂黏膜下及間質(zhì)區(qū)以中性粒細(xì)胞為主伴有少量淋 巴細(xì)胞的炎癥細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，間質(zhì)水腫。第7日時腎盂黏膜下及間質(zhì)內(nèi)可見淋巴細(xì)胞灶性浸潤，并可見少 量嗜酸性粒細(xì)胞，間質(zhì)毛細(xì)血管擴(kuò)張；至15d時仍可見間質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管增生、擴(kuò)張，并有少量纖維母細(xì)胞、肉芽組織形成。 

手術(shù)+感染模型

實驗方法

大腸埃希菌(O111B4)菌液的制備：將菌種接種于肉湯培養(yǎng)基，37℃、5％CO2孵箱內(nèi)孵育12h，利用傾斜平板法制備 1000000/ml濃度菌液待用。體重為200g左右雄性大鼠，禁止飲水18h后經(jīng)腹腔按30mg/kg體重劑量注射戊巴bi妥鈉麻醉。動 物仰臥固定手術(shù)板上，常規(guī)消毒腹部皮膚并去毛，鋪無菌手術(shù)巾。沿下腹部作長約2cm正中切口，逐層切開腹壁進(jìn)入腹腔， 充分暴露左側(cè)輸尿管及膀胱；用4號縫合絲線從中段輸尿管兩旁分別向側(cè)腹部穿針并引出縫合線，兩針盡量保持相近，暫不 結(jié)扎，用動脈jia夾閉陰莖，用 TB針向膀胱內(nèi)緩慢注入0.75ml菌液。然后拉緊腹壁外面的縫合線兩端，以適當(dāng)松緊度“結(jié)扎” 輸尿管。逐層縫合腹壁切口，松開陰莖dong脈夾，術(shù)后動物恢復(fù)常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和進(jìn)食。手術(shù)后20h，拆去腹壁外面輸尿 管結(jié)扎線，使輸尿管重新開放。分別在規(guī)定的時間用動脈jia夾住大鼠陰莖后，用乙mi麻醉，仰臥于手shu臺上，無菌條件下開 胸、開腹，抽出心血和尿液，切取左右腎臟和脾臟，作肉眼檢查、細(xì)菌培養(yǎng)及病理組織學(xué)檢查。

模型特點

術(shù)后第3日模型動物膀胱尿液即能培養(yǎng)出細(xì)菌，于麥康凱培養(yǎng)基上生長出紅色圓形菌落。第7日時細(xì)菌培養(yǎng)陽性率分別可高達(dá) 80％以上，這種高陽性率可持續(xù)保持15d以上。結(jié)扎一側(cè)腎臟腎組織細(xì)菌培養(yǎng)也有細(xì)菌生長，未結(jié)扎一側(cè)腎臟細(xì)菌培養(yǎng)陽性 少見，且持續(xù)時間較短。心血和脾臟細(xì)菌培養(yǎng)均為陰性。肉眼觀察模型動物左腎體積較右腎有不同程度增大，左腎表面可見 數(shù)量不等的微小膿腫，個別腎臟有突出腎表面的較大膿腫；切面腎盂擴(kuò)大，黏膜充血、腫脹，腎盂內(nèi)有膿性分泌物，有的腎 切面可見微小膿腫或錐形炎癥灶。右腎外觀和切面未見明顯異常。鏡下病理觀察顯示，術(shù)后3d模型動物左腎腎盂腎盞黏膜充 血腫脹，有的可見黏膜表面有局灶性膿性分泌物，黏膜下可見大量中性粒細(xì)胞浸潤。腎間質(zhì)血管充血，多數(shù)腎臟可見膿腫， 在一些腎乳頭部尚可見大小不一的錐形炎癥灶；腎小管不同程度擴(kuò)張，以遠(yuǎn)曲小管為重；小管周圍有較多中性粒細(xì)胞浸潤， 部分腎小管上皮細(xì)胞壞死、脫落，管腔內(nèi)可見膿細(xì)胞及少量管型。腎小球無明顯損傷。術(shù)后7d動物左腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞減少， 腎盂黏膜下、腎小管周圍可見以中性粒細(xì)胞為主，伴有較多淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的炎癥細(xì)胞浸潤；膿腫灶邊緣出現(xiàn)較多成纖 維細(xì)胞，灶內(nèi)除有中性粒白細(xì)胞外，尚有大量淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞。腎盂黏膜充血腫脹減輕，黏膜下中性粒細(xì)胞細(xì)胞浸潤明 顯減少，出現(xiàn)較多單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞。右腎組織無明顯組織形態(tài)學(xué)改變。

需確認(rèn)的信息

1. 模型種屬（大鼠還是小鼠或是其他種屬）

2. 動物體重有無要求，年齡有無要求

3. 雌雄有無要求

4. 模型構(gòu)建具體方案

5. 取材要求（采血、取組織樣本）

腎盂腎炎動物模型  泌尿系統(tǒng)模型 

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