病毒基因組DNA/RNA快速提取試劑盒

產(chǎn)品介紹：

采用特異性結(jié)合病毒 DNA/RNA  的離心吸附柱和緩沖液系統(tǒng)，病毒

DNA/RNA 提取試劑盒適合于從無細胞體液，包括血漿、血清、腹水、培養(yǎng)細胞上清液、腦脊髓液及尿液等中快速提取高純的病毒 DNA/RNA。該產(chǎn)品可以滿足絕大多數(shù)的病毒 RNA/DNA 的同時提取要求， 如病毒 RNA：HCV（丙肝病毒）,HIV（艾滋病毒）,和HTLV（人類嗜 T 淋巴細胞病毒）； 病毒 DNA：HBV（乙肝病毒）和 CMV（巨細胞病毒）等等。病毒裂解后，DNA/RNA 后在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜（特別配備了 Poly Carrier 可以從體系中輕松捕獲微量核酸），再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的病毒 DNA/RNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。純化后的病毒核酸無雜質(zhì)和 PCR 抑制劑，可直接適用于 PCR/RT-PCR 分析。

產(chǎn)品特點：

不需要使用有毒的苯fen等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。

節(jié)省時間，簡捷，單個樣品操作一般可在 30 分鐘內(nèi)完成。

多次柱漂洗確保高純度，提取的病毒 DNA/RNA 純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種常規(guī)操作，包括 PCR/RT-PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。

注意事項：

所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

開始實驗前將需要的水浴先預熱到特定溫度備用。

Poly Carrier：

Poly Carrier 使用方法：如果起始處理量很少，我們推薦使用 Poly Carrier，如果預期有較大量核酸產(chǎn)量，用戶可以根據(jù)需要選擇是否加入 Poly Carrier。使用時在每個樣品提取所需裂解液 VCB 中加入 2μl Poly Carrier 儲存溶液， 將裂解液

VCB 與 Poly Carrier 溶液充分顛倒混勻即可(裂解液 VCB 容易起泡沫，請勿使用渦旋振蕩混勻)。也可根據(jù)樣品數(shù)量，在總共需要的裂解液 VCB 中加入總共需要的 Poly Carrier 混勻備用?；旌弦涸谑覝?nbsp;24 小時內(nèi)穩(wěn)定。

操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）

提示：第yi次使用前請先在 10ml 漂洗液 RW 中加入 40ml 無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

1.在一個新的 1.5ml  離心管內(nèi)加入 20μl 蛋白酶 k。

2.向上述離心管內(nèi)加入 200μl 血清等體液（需回復到室溫，不足可用 0.9% NaCl 或者 PBS 補足），加入 200μl 裂解液 VCB， 立刻渦旋振蕩充分混勻。

如果處理樣品量小或者病毒預期濃度較低，建議在 200μl 裂解液 VCB 中加入 2μl Poly Carrier 儲存溶液。

3.56℃孵育 15 分鐘。

4.加入 250μl 無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，室溫放置 5 分鐘。

如果周圍環(huán)境高于 25℃,乙醇需要冰上預冷后再加入。

5.將上述混合物加入一個吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm 離心 30-60 秒，倒掉收集管中的廢液。

6.加入 500μl 去蛋白液 RE，12,000rpm 離心 30 秒，棄廢液。

7.加入 500μl 漂洗液 RW（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心 30 秒，棄廢液，加入 500μl 漂洗液 RW，重復一遍。

8.將吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000rpm 離心 2 分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

9.取出吸附柱 RA，放入一個 RNase free 的離心管中，在吸附膜的中間部位加 30-50μl RNase free H20（事先在 65－70℃水浴中加熱效果更好）， 室溫放置 1 分鐘， 12,000rpm 離心 1 分鐘。如果想得到較多量的 DNA/RNA，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，12,000rpm 離心 1 分鐘。

洗脫體積越大，洗脫效率越高。如果需要 DNA/RNA 濃度較高，可以適當減少洗脫體積， 但是最小體積不應少于 20μl，體積過小降低洗脫效率，減少 DNA/RNA 產(chǎn)量。

10.病毒 DNA 可以存放在 2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在-20℃。病毒 RNA 建議立刻使用，否則立刻短期放置在-70℃?zhèn)溆谩?/p>