替代Beckman coulter Agencourt SPRIselect核酸片段篩選試劑盒 
貨號(hào)：WG23318

片段篩選磁珠使用說明書

概述

本產(chǎn)品為超順磁性微球，配合緩沖液體系，在加入不同比例磁珠時(shí)，可吸附不同大小的 DNA 片段，從而達(dá)到片段篩選的目的。本產(chǎn)品操作簡單，使用便捷，篩選后的產(chǎn)物可直接用于二代測(cè)序平臺(tái)的文庫構(gòu)建。本產(chǎn)品可手工操作，也適用于自動(dòng)化的工作站。

產(chǎn)品組成

注意事項(xiàng)

 1. 片段篩選磁珠須在 2-8℃儲(chǔ)存，防止冷凍。

 2. 使用本產(chǎn)品前，必須仔細(xì)閱讀本說明書。

 3.  用戶需自備洗滌液（70-80%乙醇，現(xiàn)配現(xiàn)用）和洗脫液（PH8.0 的 Tris-Hcl）。

操作步驟

1.準(zhǔn)備步驟：

1. 根據(jù)所需目的片段的大小確定片段篩選磁珠的加入量（依照下表進(jìn)行選擇）：

加入磁珠量的計(jì)算：加入磁珠量=（倍數(shù)）×原始 DNA 樣本體積

1. 使用前確保磁珠混合均勻。

2. 實(shí)驗(yàn)前需準(zhǔn)備洗脫液和新鮮配置的 70%-80%乙醇。

2.dì一次結(jié)合

*

1. 將樣本置于 1.5ml 離心管中，加入預(yù)先計(jì)算好的磁珠的量(起始倍數(shù)) 。移液器吹吸混勻 5 次，

在室溫下孵育 5 分鐘。短暫離心以收集所有液體。（此過程中磁珠主要吸附大的 DNA 片段，小的DNA 片段仍留在溶液中。）

注意：不要漩渦震蕩，可能會(huì)降低磁珠的結(jié)合效率。

*：例如，樣本量為 50ul，所需目的片段大小為 350bp 左右，則此步驟中加入磁珠的量為 0.6×50ul=30ul.

1. 將離心管置于磁力分離器上，靜置 1 分鐘使磁珠從溶液中分離出來。

c)將上清轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的離心管中，此時(shí)目的DNA 片段存在于上清中。

注意：轉(zhuǎn)移上清時(shí)不要帶走磁珠，若磁珠移除不徹dǐ會(huì)使最終的分選結(jié)果發(fā)生變化。

3.第二次結(jié)合
*
a)按照比例在上清中繼續(xù)加入混合均勻的磁珠 ，用移液器輕柔吹吸混勻 5 次。
*：加入體積=(最終倍數(shù)-起始倍數(shù))×原始 DNA 樣本體積，例如樣本量為 50ul，所需目的片段大小為 350bp 左右，則此步驟中加入磁珠的量為（0.8-0.6）×50ul=10ul.
b)短暫離心以收集液體，于室溫孵育 5 分鐘。
c)將離心管置于磁分離裝置上，直至溶液變澄清。
d)小心地吸棄上清，特別注意此時(shí)不能造成磁珠的損失，否則會(huì)造成回收效率下降。

4.洗滌
移除上清后，加入 200ul 70%-80%的乙醇，輕柔地吹吸混勻 5 次室溫孵育 5 分鐘，然后除去乙醇。重復(fù)此步驟共洗滌 2 次。
注意：洗滌之后，盡可能地除盡乙醇，殘留的乙醇可能會(huì)影響下游的實(shí)驗(yàn)?？蓪㈦x心管置于磁分離器上開蓋室溫
晾干，但注意不要使磁珠過于干燥，以免影響洗脫效率。

5.洗脫
a)除盡乙醇后，加入 20ul 洗脫液（洗脫液體積可調(diào)整），輕柔吹吸混勻 5 次。
b)將離心管置于磁分離器上，靜置 1 分鐘，溶液澄清后小心地將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中，所需目的DNA 片段即存在于溶液中。
注意：加入洗脫液之后 DNA 可快速完quán地從磁珠上洗脫下來，不需要進(jìn)行二次洗脫。洗脫液最小體積為 20ul，
可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行調(diào)整。需注意，洗脫體積小于 40ul 時(shí)要保證所有磁珠能夠充分與液體接觸，避免影響洗脫效率。

常見問題及參考意見

常見問題    可能的原因    建議

得率低    結(jié)合不充分    結(jié)合過程中要使磁珠充分與液體接觸
    操作過程中磁珠損失    在操作過程中盡量避免磁珠的損失，在磁分離之前短暫離心收集液體
    洗脫體積過少    可適當(dāng)增加洗脫液的體積