M1051 MBP標(biāo)簽純化試劑盒

產(chǎn)品貨號：M1051

儲存條件：4℃保存

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品簡介

MBP標(biāo)簽蛋白純化試劑盒能夠純化帶有麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)標(biāo)簽蛋白。MBP可促進(jìn)連接蛋白的正確折疊，增加在細(xì)菌中過量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。Dextrin Beads 6FF 可以一步純化 MBP 融合蛋白，結(jié)合的融合蛋白可以用10 mM 麥芽糖進(jìn)行溫和洗脫，保護(hù)了標(biāo)簽蛋白的活性。如果要去除 MBP 融合部分可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。

注意事項(xiàng)：

1、試劑盒中的Dextrin Beads 6FF體積5ml為beads體積，總體積10ml（保護(hù)液為20%乙醇溶液）使用前需要充分混合均勻；

2、請勿在-20oC或更低溫度冷凍保存Dextrin Beads 6FF。

3、若離心不能wan全除去蛋白樣品中的不溶物，可以將樣品溶液用0.45µm的濾膜過濾。

4、若使用本說明書提供的條件無法達(dá)到理想的純化效果，可嘗試改變洗雜液和洗脫液中咪唑的濃度和(或)pH。

5、請穿實(shí)驗(yàn)服戴一次性手套操作。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品準(zhǔn)備 

樣品在上樣前建議離心或用0.22μm 或 0.45μm 濾膜過濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。

2. Dextrin Beads 6FF  裝填

重力柱的裝填

1) 取3ml AC層析空柱，純水浸泡墊片后，裝入下墊片（偏小的墊片），加入適量純水潤洗柱管和墊片，關(guān)閉下出口。

2) 將 Dextrin Beads 6FF 混合均勻，用槍頭吸取適量填料加入至重力柱中(介質(zhì)實(shí)際體積占懸液的一半)，打開下出口流干保護(hù)液。

3) 加入適量純水沖洗介質(zhì)，待柱管中液體重力流干后，關(guān)閉下出口。

4) 裝入潤洗后的上墊片，確保墊片與填料之前沒有空隙，且保持水平。

5) 裝填好的重力柱可以直接加入平衡液進(jìn)行平衡，暫不使用時則加入保護(hù)液，2-8℃保存。

3.樣品純化

Dextrin Beads重力柱使用：各溶液用量均按照柱體積計算（例如：2 個柱體積，1 ml 規(guī)格對應(yīng)為 2 ml 溶液，5 ml 規(guī)格對應(yīng)為 10 ml 溶液）。整個純化流程大約需要 30 min（主要取決于樣品體積和溶液的粘稠性），操作快捷。

1) 將 Dextrin Beads 6FF 重力柱固定在鐵架臺上，依次去掉下端塞和上端塞，流干重力柱的保護(hù)液。

2)  向柱管中加入 5 個柱體積的平衡液，進(jìn)行平衡 ，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。

3) 將樣品加到平衡好的重力柱中，樣品保留時間至少 2 min，保證目的蛋白與介質(zhì)充分接觸 ，提高目的蛋白的回收率。收集流出液，用于 SDS-PAGE 分析蛋白質(zhì)的結(jié)合情況，在出現(xiàn)問題時，更方便尋找解決問題的方案。

4) 用 10-15 倍柱體積的洗雜液進(jìn)行清洗 ，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

5) 使用 5-10 倍柱體積的洗脫液進(jìn)行目的蛋白的洗脫 ，分段收集，每一個柱體積收集一管，分別檢測，既可以保證所有結(jié)合的目的蛋白被洗脫，又可以得到高純度和高濃度的蛋白。

6) 依次使用 3 倍柱體積的平衡液和 5 倍柱體積的去離子水平衡填料。將重力柱保存在等體積的 20%乙醇中，置于 2-8℃保存，防止填料被細(xì)菌污染。

4. SDS-PAGE 檢測

將使用純化產(chǎn)品得到的樣品（包括流出組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品使用 SDS-PAGE 檢測純化效果。

5. 在位清洗

Dextrin Beads 6FF 純化產(chǎn)品可以重復(fù)使用而無需再生，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，需要進(jìn)行在位清洗操作（Cleaning-in-Place，CIP）。

3 倍柱體積的去離子水；

3 倍柱體積的 0.1% SDS 或 0.1 M NaOH 溶液；

3 倍柱體積去離子水，20%乙醇 2-8℃保存。