BH3470 小鼠骨肉瘤

細(xì)胞鑒定：種屬鑒定已通過

細(xì)胞來源：國家資源庫
細(xì)胞背景：C Khanna1998年建立，是合適的腫瘤模型。在 BALB/c 小鼠中形成腫瘤，并在超過 90% 的接種小鼠中自發(fā)轉(zhuǎn)移到肺部。CD31 + Ref+。分泌型磷蛋白 1（骨橋蛋白）因子 VIII；整合素結(jié)合唾液蛋白 (BSP); 比利亞安; 裝飾素；小人 2 (ezrin) 。骨唾液蛋白、biglyan、decorrin 和骨橋蛋白的表達(dá)提示骨譜系細(xì)胞。

細(xì)胞特性：
1） 來源：BALB/c 器官: 骨 疾病: 骨肉瘤 來源轉(zhuǎn)移灶: 肺 細(xì)胞類型: 成骨細(xì)胞;

2） 形態(tài)：成骨細(xì)胞  貼壁生長

 用途：僅供科研使用
培養(yǎng)條件
：1） 準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
注意事項:該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其熒光強(qiáng)度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。建議收到細(xì)胞后至少傳3代，凍存留種后再進(jìn)行篩選。初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細(xì)胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時細(xì)胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）ydbm-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻?qū)⒓?xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用