化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>技術(shù)服務(wù)>細(xì)胞生物學(xué)服務(wù)>細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)>EC96302 LBA4404感受態(tài)(電轉(zhuǎn))
EC96302 LBA4404感受態(tài)(電轉(zhuǎn))
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海語純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 EC96302
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2024/10/31 10:09:40
- 訪問次數(shù) 11
產(chǎn)品標(biāo)簽
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產(chǎn)品簡介
LBA4404菌株為 Ach5型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利f平抗性基因 Rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此
菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的章魚堿型 Ti 質(zhì)粒 pAL4404,此質(zhì)粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入
植物基因組必需的元件,pAL4404 質(zhì)粒自身的 T-DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T
DNA 順利轉(zhuǎn)移)。 pAL4404 型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽:Strep,賦予 LBA4404 菌株鏈m素抗性,適用于菸
草、番茄、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司開發(fā)的 LBA4404 電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化:
經(jīng) pCAMBIA2301 質(zhì)粒 (size:11633 bp)檢測轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
LBA4404
電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型:Ach5 (RifR) Ti pAL4404 (StrepR) Octopine
存儲條件
-80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除章魚堿型 Ti 質(zhì)粒 pAL4404 外,無外源質(zhì)粒 DNA 殘留;
電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預(yù)冷;或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出,在超凈工
作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上,使乙醇充分揮發(fā),然后插入冰中預(yù)冷;
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化,加入 0.01-1μg 質(zhì)粒 DNA(體積不大于 5μl),用 200
μl 槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?;旌衔锟焖俎D(zhuǎn)移到預(yù)冷的電擊杯中,蓋上杯蓋;
3. 開啟電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù)(2500 V ,200 Ω,25μF),將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,電擊完成后快速插
入冰中,加入 900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無菌空管中,28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。
(注:此電轉(zhuǎn)化參數(shù)為 Bio-rad 推薦,使用者也可使用電轉(zhuǎn)儀所推薦的 Protocol 進行操作)
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻,并涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板
上,倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天(當(dāng)平板只含有 50μg/ml Kan 時,28℃培養(yǎng) 48 h 即可;平板中同時
加入 50μg/ml Kan,20μg/ml Rif 時,需 28℃培養(yǎng) 60h;如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時,則需要 28 ℃
培養(yǎng) 72~90 h)。
注意事項
1. 感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10;
3. 利f平濃度不應(yīng)高于 25μg/μl,利f平濃度過高不利于農(nóng)桿菌生長,會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率;
4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略),所以相關(guān)抗性基因可以不用添加