化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>技術(shù)服務(wù)>細(xì)胞生物學(xué)服務(wù)>細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)>EC96303 GV3101（pSoup-19）（電轉(zhuǎn)）
EC96303 GV3101（pSoup-19）（電轉(zhuǎn)）
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海語(yǔ)純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) EC96303
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2024/10/31 10:25:14
- 訪問(wèn)次數(shù) 7
產(chǎn)品標(biāo)簽
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
P19 蛋白來(lái)源于番茄叢矮病毒，可抑制宿主對(duì)外源基因的 RNA 沉默效應(yīng)，提高異源基因轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性，
進(jìn)而促進(jìn)異源蛋白的表達(dá)，廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因植物及煙草葉片，擬南芥葉片，番茄葉片或原生質(zhì)體的瞬時(shí)
表達(dá)系統(tǒng)中。GV3101 菌株為 C58 型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利f平抗性基因 Rif，為了便于轉(zhuǎn)
化操作，此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質(zhì)粒含有 vir 基因
且可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T-DNA 順利轉(zhuǎn)移。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽： Gent ，
賦予 GV3101 菌株慶大m素抗性；在 GV3101 菌株中轉(zhuǎn)入 help 質(zhì)粒： pSoup-p19 即為 GV3101(pSoup-p19)
菌株，可幫助 pGreen，62SK，pGs2 等質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制，同時(shí)賦予該菌株四環(huán)素（Tet）抗性。適用
于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司開發(fā)的 GV3101 (pSoup-p19)電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適
用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng)
pGs2(卡那m素抗性)質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
GV3101（pSoup-p19）
10 ×50μL
100 ×50μL
定制
電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
基因型：
C58 (RifR ) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline(pSoup-p19-TetR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pMP90 和 pSoup-p19 質(zhì)粒外，無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率
≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預(yù)冷；或者將儲(chǔ)存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工
作臺(tái)中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā)，然后插入冰中預(yù)冷；
2.
取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質(zhì)粒 DNA（體積不大于 5μl），用
200μl
槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?；旌衔锟焖俎D(zhuǎn)移到預(yù)冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；
3. 開啟電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)（2500 V ，200 Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成后快速插
入冰中，加入
900μl 無(wú)抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無(wú)菌空管中，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí)。
（
注：此電轉(zhuǎn)化參數(shù)為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉(zhuǎn)儀所推薦的 Protocol 進(jìn)行操作）
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板上，
倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天（當(dāng)平板只含有 50μg/ml Kan 時(shí)，28℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同時(shí)加入
50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 時(shí)，需 28 ℃培養(yǎng) 60h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時(shí)，則需要 28 ℃
培養(yǎng)
72~90 h）。
注意事項(xiàng)
1.
感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用；
2.
加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3.
利f平濃度不應(yīng)高于 25μg/μl，利f平濃度過(guò)高不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率；
4.
由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關(guān)抗性基因可以不用添
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