【概述】2022 年最新版食品安全抽檢實(shí)施細(xì)則更新了針對(duì)于牛、 羊、 豬、 雞的肌肉、 及肝、 腎組織中部分四環(huán)素類(lèi)、 磺胺類(lèi)和喹諾酮類(lèi)的檢測(cè)方法——《GB 31658.17-2021 動(dòng)物性食品中四環(huán)素類(lèi)、 磺胺類(lèi)和喹諾酮類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，中檢維康參照該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行試驗(yàn)， 并優(yōu)化了部分參數(shù)， 建立了一份具有良好回收率及穩(wěn)定性， 能滿(mǎn)足國(guó)標(biāo)要求的 SPE-HPLC-MS/MS 方法， 可供參考。

【實(shí)驗(yàn)/設(shè)備條件】

（ 1） 色譜條件
儀器： UPLC-MS/MS（ Thermo Fisher TSQ Endura）
色譜柱： Hypersil GOLD C18 (2.1 mm×100 mm， 1.9 μm)
流動(dòng)相： A： 水（ 0.1 %甲酸） B： 甲醇： 乙腈=2:8（ 0.1 %甲酸）

洗脫方式： 梯度洗脫， 見(jiàn)表 1
流速： 0.3 mL/min
柱溫： 35℃
進(jìn)樣量： 10 μL

（2） 質(zhì)譜條件
離子源： HESI
電噴霧電壓： 3500 V
鞘氣壓力： 40 arb
輔氣壓力： 2 arb
離子傳輸管： 380 ℃
輔氣溫度： 350 ℃

【樣品提取】

準(zhǔn)確稱(chēng)取粉碎均勻的肉類(lèi)樣品 1 g（ 精確至 0.01 g） 于干凈離心管中， 加入 8 mL Mcllvaine-Na2EDTA 溶液， 渦旋混勻后超聲提取 20 min， -5℃ 下 120000 r/min 離心 5 min， 取出上清液于另一干凈離心管， 試樣殘?jiān)尤?nbsp;8 mL 磷酸鹽緩沖液， 同上述操作， 合并兩次提取液， -5℃ 下 120000 r/min 離心 5 min， 上清液待凈化。
Mcllvaine-Na2EDTA 緩沖液： 取檸檬酸·一水 12.9g、 磷酸氫二鈉·十二水 10.9g、 乙二胺四乙酸二鈉·二水 39.2g,加水 900mL,用 1mol/L 的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH 至 5.0± 0.2， 用水稀釋至 1000mL。
磷酸鹽緩沖液： 取 0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液 190 mL,用 0.05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液稀釋至 1000mL。

【實(shí)驗(yàn)/操作方法】

二、 樣品凈化（Clover ®HLB， 200mg/6mL）
活化： 固相萃取柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。
上樣： 取上述待凈化液加入活化好的固相萃取柱中。
淋洗： 依次用 5 mL 水， 5 mL 5%甲醇-水溶液， 抽干。
洗脫： 用 8 mL 甲醇： 乙酸乙酯： 氨水=50:50:2 溶液進(jìn)行洗脫。
收集全部洗脫液， 45℃ 下氮吹至 100 μL 左右， 加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,過(guò) PTFE 親水濾膜， 上機(jī)測(cè)試。
三、 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液的制備
取 6 個(gè)空白基質(zhì)樣品同正常樣品一樣操作， 收集洗脫液后， 于洗脫液中分別加入適量標(biāo)液， 再與其他樣品洗脫液一同氮吹， 定容， 使最終上機(jī)溶液的濃度分別為 2 μg/L、 10 μg/L、 50 μg/L、 100 μg/L、 200μg/L、500 μg/L。

優(yōu)化 步驟：
1. 在提取過(guò)程中降低離心的溫度至-5℃可以更好的制樣品中的脂肪在水溶液表面的分散， 有利于樣品的提取轉(zhuǎn)移。
2. 在超聲提取完合并兩次的提取液之后， 再進(jìn)行一次離心， 更好的去除基質(zhì)的影響， 便于上樣過(guò)柱。
3. 在淋洗過(guò)程中使用 5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗液， 可以減少在淋洗過(guò)程中部分目標(biāo)物的損失。
4. 標(biāo)準(zhǔn)中氮吹至 100 μL 左右， 不氮吹干可以減少在氮吹過(guò)程中部分目標(biāo)化合物的損失。
5. 復(fù)溶時(shí)， 加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目標(biāo)化合物的峰型， 同時(shí)提高部分化合物的回收率。

6.為了改善上樣后的流速問(wèn)題， 使用Clover ® HLB (貨號(hào) ： HLB2006-M)較普通的 HLB 凈化柱可以獲得更好的流速。

【儀器/耗材清單】

• CLOVER固相萃取裝置/萃取儀中檢維康儀器

  前處理設(shè)備在線(xiàn)詢(xún)價(jià)
• CLOVER高速渦旋提取儀/混勻儀中檢維康儀器

  前處理設(shè)備在線(xiàn)詢(xún)價(jià)