細(xì)菌內(nèi)毒素（脂多糖）的的純化

脂多糖（Lipopoly saccharide，LPS）是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種成分，脂多糖對宿主是有毒性的。脂多糖只有當(dāng)細(xì)菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細(xì)胞后才釋放出來，所以叫做內(nèi)毒素。

三氯醋酸法（Trichloroacetic Acid，TCA）、酚水法、苯酚╱氯仿╱石油醚法（PCP）、DMSO法、高壓超聲處理法所提取的LPS或多或少受到蛋白質(zhì)、核酸及多糖的污染，故需作一定的純化。LPS的純化方法目前最-常用的為超速離心（4萬轉(zhuǎn)×4小時，共三次），在這一條件下，LPS可沉淀下去，而蛋白質(zhì)、核酸及多糖則保留在上清液中，去除上清液即可得到較為純化的LPS。

但是這一方法需時較長，且質(zhì)量過關(guān)的超速離心機(jī)目前在國內(nèi)亦不十分普及，故而難以推廣應(yīng)用。我們在實際工作中體會到，用任何方法提取的LPS，可再以PCP純化一次（140ml/g LPS），然后只需一次超離，即可取得高度純化的LPS。

提取的LPS除可被蛋白質(zhì)、核酸及多糖污染外，還可被一些小分子物質(zhì)，如多胺、陽離子（Ca++、Mg++、K+等）的污染。通過電透析可將這類小分子物質(zhì)除去。此時形成的LPS為酸性LPS（由LPS中類脂A上的磷酸基團(tuán)形成的)。應(yīng)用堿中和LPS，可變成LPS的鹽。如用NaOH中和則可變成LPS鈉鹽，而應(yīng)用三乙基乙胺則可變成LPS三乙胺鹽、后者極易溶解于水，已廣泛地應(yīng)用于生物學(xué)研究。

綜上所述，LPS提取方法較多，應(yīng)當(dāng)根據(jù)菌種和實驗條件而選用合適方法。PCP法對R型菌尤顯長處，高壓超聲法雖可用于S或R菌，但方法步驟繁雜；DMSO法與TCA法已很少用到；而酚水法無論產(chǎn)量，純度及物理性質(zhì)均較滿意的，不失為一個實用的方法。LPS純化目前一般采用PCP法及一次超速離心，應(yīng)用該法可使LPS污染物包括蛋白質(zhì)、核酸及多糖除去，而應(yīng)用片透析方法，則可除去LPS中的小分子物質(zhì)如多胺、二價陽離子，從而可得LPS轉(zhuǎn)化成實驗需要的鹽類。