TLR4基因：揭示其與LPS直接關(guān)聯(lián)并驗證為Lps基因的產(chǎn)物

最近有兩個功能實驗進一步證實了Tlr4基因與Lps的直接關(guān)系。Hoshino等利用基因敲除技術(shù)制備出一種TLR4缺失（TLR4-/-）小鼠，發(fā)現(xiàn)這種小鼠的巨噬細胞，受LPS刺激時不能產(chǎn)生TNFα和NO，小鼠的脾臟B細胞對LPS也無增殖反應(yīng)，實驗結(jié)果與C3H/HeJ小鼠的細胞相同。作者進一步將C3H/HeJ和C3H/HeN小鼠的編碼TLR4跨膜區(qū)和胞漿區(qū)的基因序列（氨基酸殘基623~835）與編碼小鼠CD14胞外區(qū)的基因序列（氨基酸殘基1～384）融合，然后連接到哺乳動物的表達載體pEF-BOS，再與NF-kB報告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到細胞內(nèi)。結(jié)果顯示，LPS刺激僅能使轉(zhuǎn)染有來源于C3H/HeN的CD14-TLR4的細胞激活，表現(xiàn)為NF-kB活性增加，不能激活轉(zhuǎn)染有C3H/HeJ小鼠CD14-TLR4的細胞。

Poltorak A研究小組最近也報道，野生型TLR4蛋白在RAW 264.7巨噬細胞內(nèi)過度表達可顯著增強細胞對LPS的敏感性，使EC50（effective concentration）減少30倍，但過度表達C3H/HeJ小鼠TLR4的同等型蛋白TLR4Pd則使細胞對LPS的敏感性顯著降低，使EC50增加2600倍，即幾乎完-全抑制LPS的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。上述結(jié)果進一步說明，TLR4是Lps基因的基因產(chǎn)物，或者說，以前提出的Lps基因與Tlr4為同一基因。因此，TLR4不僅特異性地識別LPS，而且能轉(zhuǎn)導(dǎo)LPS的跨膜信號，在介導(dǎo)細胞LPS反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。